利用沃特世uplc-xevotq系统一次性检测

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1、[።፿ଗገ]利用沃特世UPLC-XevoTQ系统一次性检测奶粉中13种激素类物质王冰袁汉成王少珍耿霞沃特世科技(上海)有限公司2010年7月，一则“乳制品致婴儿性早熟”的新闻报道引3、分别用6ml甲醇、6ml水活化平衡OasisHLB（200mg/6cc）起了社会广泛的关注。这是至08年“三鹿奶粉”事件之小柱。后，又一起有关乳制品食品安全事件。事件一出，农业部4、上样，流速控制在3-4ml/min。立即出台检测方法，对相关奶粉中的激素进行检测，检测结果为：该乳品中激素含量水平均在国家限定范围5、清洗:分别用6ml酸洗(5%甲醇、2%冰醋酸)、6ml

2、碱洗内。此次事件中人们对婴儿食用奶粉中的雌激素和孕激(5%甲醇、2%氨水)、6ml甲醇水溶液(10%甲醇)进行清素水平是否超标的问题引起了广泛的讨论，同时对激素洗。类物质检测的相关指标提出了更高的要求。曾有专家指6、将清洗后的OasisHLB小柱抽干10min。出目前在我国还没有专门针对奶粉中激素检测的专门的国家标准检测方法，所采用的是动物性食品中激素检测7、乙酸乙酯/甲醇(9/1v/v)活化氨基小柱(Sep-pakNH2方法。针对这一问题，沃特世最新推出了UPLC®-Xevo™TQ500mg/6cc)，活化平衡后与OasisHLB柱串联。质谱系统

3、，专门针对奶粉中雌激素和孕激素物质进行快8、洗脱:分别用6ml乙酸乙酯/甲醇(9/1v/v)、6ml5%氨水速检测与定量分析。甲醇溶液洗脱串联后的两根柱子，收集洗脱液。沃特世UPLC-XevoTQ系统对奶粉中性激素快速检测的原理9、氮气流下吹干洗脱液至0.2ml。首先利用UPLC(超高效液相色谱)的超高效分离能力实现10、依次加入0.4ml乙腈、0.4ml水溶液，分别涡旋，使最终对被检测的奶粉的有效分离，并采用XevoTQ的IntelliStart™体积为1ml，其中乙腈与水的比例为1:1。功能快速方便建立质谱，PICS(子离子确认扫描)功能辅助定

4、性，以及应用Quanpedia(方法库)自动导入和导出生11、7000rpm离心10min或过膜，收集上清液于UPLC/MS/MS成MRM方法及液相方法，最后通过利用UPLC/XevoTQ的正分析。负电离模式快速切换功能,实现一次进样，同时检测多种LC条件激素(7种雌激素，6种孕激素）,明显缩短检测周期,提高检测通量。LC系统：ACQUITYUPLC®系统色谱柱：ACQUITYUPLCHSST3,2.1x50mm,1.8μm柱温：40°C分析条件与步骤样品室温度：10°C流速：0.6mL/min本试验适用于分析外源性激素类物质，如果分析内源性流动相

5、A：乙腈物质可对检测样品进行酶解，酶解后的处理方法相同。流动相B：水样品前处理1、精确称取1g奶粉样品于8ml水中，充分混匀，超声5min。2、在混匀液中加入1ml冰醋酸，酸化后再添加16ml乙腈进一步沉淀水溶性蛋白。7500rpm离心10min,取上清液于氮气流下吹至乙腈含量<5%。[።፿ଗገ]梯度表:17a-羟基ESI+331.496.92822孕酮时间流速%A%B递变曲线109.028300.000.60035.065.0Initial孕酮ESI+315.3596.924220.200.60040.060.011108.924260.800.

6、60045.055.06炔诺酮ESI+299.497.0528201.500.60050.050.06109.0728322.000.60060.040.06双烯雌酚ESI-264.9892.9538222.300.60095.05.0624938245.000.600100.00.01醋酸甲基ESI+385.2325.126146.000.60035.065.01孕酮267.112618弱洗针溶液：10%乙腈水溶液乙酸氯地ESI+405309.72116强洗针溶液：90%乙腈水溶液孕酮总运行时间：6min345.72112进样体积：5μL，不充满

7、定量环（针溢出）甲羟孕酮ESI+387.1327.32316乙酸酯MS条件285.52316MS系统：XevoTQMS电离模式：ESI+/ESI-数据采集与处理喷雾电压：3.2kv(ESI+)/2.8kv（ESI-）本试验数据处理系统为Waters®MassLynx™4.1SCN729，质脱溶剂气：氮气，1000L/Hr，450°C谱方法开发用此软件的IntelliStart功能，不需要有经验的锥孔气：氮气，50L/Hr质谱操作人员进行方法开发与优化，同时配合TargetLynx®源温度：150°C软件，只需设置几个参数即可得到完整的报告。Inte

8、lliStart采集模式：多反应监测(MRM)功能可同时开发正负离子质谱参数，并实现一次进样正负离子同时扫描，如图1，图2