子宫内膜腺癌雌激素受体亚型的表达及其与临床病理的关系.doc

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1、子宫内膜腺癌雌激素受体亚型的表达及其与临床病理的关系［摘要］目的探讨雌激素受体a（ERa）、ERB在子宫内膜样腺癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法选择2011年1月〜2012年12月在广西医科大学附属肿瘤医院经组织学证实的93例子宫内膜腺癌（子宫内膜癌组）及31例正常子宫内膜（对照组）组织，分别采用qRT-PCR及免疫组化法检测ERa、ERBmRNA及蛋白的表达情况。结果子宫内膜癌组ERamRNA表达量及蛋白阳性表达率、ERa/ERBmRNA均明显低于对照组，差异均有统计学意义（P0.05）□子宫内膜癌组织中ERa与ER（3阳性表达率呈负相关（r=-0.234,P［关键词］

2、子宫内膜腺癌；雌激素受体a；雌激素受体B［中图分类号］R737.33［文献标识码］A［文章编号］1673-7210（2016）02（b）-0087-04子宫内膜癌被认为是一种激素依赖性肿瘤，雌激素受体（ER）、孕激素受体水平的改变与子宫内膜癌的发生发展及预后密切相关。本实验通过PCR技术及免疫组化检测子宫内膜癌中ERa、ERB表达的变化，以探讨其与子宫内膜癌发生发展的关系及临床意义。1资料与方法1.1一般资料选取2011年1月〜2012年12月在广西医科大学附属肿瘤医院因子宫内膜癌手术治疗切除的子宫内膜组织93例(子宫内膜癌组)，年龄33〜76岁，中位年龄53岁，术前均无雌、孕激素使

3、用史。术后经病理证实。手术病理分期按国际妇产科联盟2009年的标准:I期55例，II期18例，III期16例，IV期4例。组织学分级：高分化45例，中分化28例，低分化20例。对照组选取因良性妇科肿瘤行子宫切除的正常子宫内膜31例，其中增生期21例，分泌期10例，年龄36〜54岁，中位年龄48岁。1.2主要试剂FastStartUniversalSYBRGreenMaster(ROX)购自美国Roche公司，RevertAidTMFirstStrandcDNASynthesisKit购自加拿大Fermentas公司,鼠抗人单克隆抗体ERa购自SantaCruz公司，鼠抗人单克隆抗体E

4、RB购自GeneTex公司,免疫组化染色试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。1.3荧光定量PCR技术检测各组组织中ERamRNA和ERBmRNA的表达Trizol法提取各组组织总RNA,利用RT-PCR试剂盒合成cDNA。ERa基因引物序列，上游：51-TGCCAAGGAGACTCGCTAC-31,下游：5LCTTCGTAGCATTTGCGGAG-31,扩增产物片段长度为209bp；ERB基因引物序列，上游：5LGGTCCATCGCCAGTTATCACAT3,下游：5ATGCGTAATCGCTGCAGACAG-31,扩增产物片段长度为227bp；以GAPDH基因为内参照，其引物序

5、列，上游：5LGAAGGTGAAGGTCGGAGT-31，下游：5LGAAGATGGTGATGGGATTTC-31,扩增产物片段长度为225bpoPCR反应体系共20UL,包括DNA荧光染料SYBRGreen10UL,上、下游引物各0.5UL,cDNA模板2UL,加水至20uLoPCR反应条件：95°C预变性10min,95°C15s,60°C60s,35次循环。采用2-AACt法对数据进行相对定量分析。实验重复3次，取均值。1.4采用免疫组织化学SP法检测ERa蛋白和ERB蛋白的表达石蜡切片（厚4Um）经二甲苯脱蜡，梯度乙醇脱水，3%双氧水封闭内源性过氧化物酶活性，室温浸泡，磷酸盐

6、缓冲液（PBS）振洗后，分别以鼠抗人单克隆抗体ERa1：200、或ERB1:200,4°C孵育过夜，过氧化物酶标志的山羊抗小鼠IgG,37°C孵育，PBS振洗，DAB显色，苏木精复染，脱水，透明，树胶封片。每次实验均设立阳性及阴性对照，ER以已知阳性的乳腺癌切片作阳性对照，以PBS液代替一抗作阴性对照。1.5结果判定ERa、ERB蛋白阳性染色主要定位于细胞核，细胞核内有黄色或棕黄色颗粒分布者即为阳性细胞。每张切片在阳性表达较高区域随机选择5个高倍视野（400倍），每个视野至少计数100个肿瘤细胞，计算阳性细胞所占比例。1.6统计学方法采用SPSS19.0统计学软件进行数据分析，计量资

7、料数据用均数士标准差（X土s）表示，两组间比较采用t检验；计数资料用率表示，组间比较采用X2检验;相关性分析采用Spearman相关系数；以P0.05）；ERa/ERBmRNA比值较对照组明显下降，差异有高度统计学意义（P表1两组子宫内膜组织中ERa、ER（3mRNA及蛋白的表达A、C：正常内膜；B、D：子宫内膜腺癌图1不同子宫内膜组织中ERa及ERB的表达情（SP染色,100X）2.2子宫内膜癌中ERa.ERB的表达与临床病理因素的关系子宫内膜癌I期、高