色谱峰纯度的定性方法

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1、色谱峰纯度的定性方法黄芳康继宏郁建胡育筑（中国药科大学南京210009）提要较系统地介绍了近年来国内外文献中有关色谱峰纯度的定性方法—仪器方法和化学计量学方法。仪器方法重点介绍了归一化比较光谱、吸收比法、光谱抑制法及导数技术。化学计量方法介绍了主成分分析法和渐近因子分析法。通过对文献方法和应用的简单介绍，比较了各种方法的特点及优缺点，总结了规律。关键词色谱峰纯度，仪器方法，化学计量学方法，色谱法在990以上。这种鉴定方法的灵敏度主要取决于物1前言质和杂质的光谱区别、相对吸收度及保留时间的差在应用色谱法

2、分离复杂物质时，色谱峰的纯度，别。最近Sievet等人通过直接计算吸收光谱对之即一个色谱峰究竟是由一种组分构成还是包含了两间的相关系数，有效地鉴定了多肽牡的重叠峰。种或两种以上的成分，成为人们首先关心的问题。2.2吸收比法（Absorbanceratio，简称AR）对于任何在紫外-可见光区有吸收的纯物质在Davis曾统计过，实际色谱图中仅有20％为纯组分峰，重叠峰占绝对多数。色谱峰纯度的鉴别已成为色两个选定波长下的吸收比为一常数，且与浓度无关。谱分析的中心问题之一。色谱峰纯度的定性方法国在组分的洗脱过

3、程中，吸收比应恒定。以这一比值K内外已有不少报道。归纳起来，这些方法可分为两对分析时间作图，纯物质应是恒定K值的方波形。类：一类是仪器方法，一类是化学计量学方法。杂质存在将使其产生扭曲。比值图不仅可以用于估计峰纯度，而且还可确定峰种类〔〕。吸收比法的可2仪器方法靠性依赖于波长的选择及吸收值的差别〔9l1，波长应尽量选择在具有最大吸收差别处〔〕。从原理上分，仪器方法可分为比较法、吸收比在多波长吸收比法（Multipleabsorbanceratio）法、光谱抑制法和导数技术等。在单通道UV/VIS中〔4

4、갱2〕用多个波长代替双波长，可使吸收比法的检测中，常应用峰向量分析〔2〕或者导数色谱〔3〕方法，选择性和灵敏度都会提高1974年Ostojic15〕首先从通过比较标准品和被测物质的峰形来判断是否有杂理论上认识到多重数组能使色谱峰的鉴定变得容质存在。由于色谱峰形常受多个因素影响，所以用峰易。仪器重复搜索找到光谱最大吸收波长并给出信形判断杂质很不可靠。双波长检测器及多通道检测号，其它波长信号比值沿色谱图给出，可直观显示所方法的出现使吸收比法和各种峰抑制技术迅速发展有峰的纯度。了起来。Marr等人〔눶〕提出

5、的多吸收比相关性理论（Mul-2.1归一化比较光谱(Normalizingandcomparingtipleabsorbanceratiocorrelation，简称MARC）是spectrafromvariouspeaksection)一种新的检验色谱峰纯度的方法，此法可通过计算分别取色谱峰的前沿、峰顶和峰尾处的光谱图色谱峰上连续多点的光谱和参比光谱的五点吸收比进行比较，如果色谱峰是纯净物形成的，那么在色谱矢量之间的相关性来鉴定峰纯度。根据参比光谱的峰各点所得的光谱仅在振幅响应上有差别，用归一不同，

6、MARC法又可分为IMARC和EMARC。化方法，所得的紫外可见光谱应完全一致，用匹配IMARC以峰顶的光谱作参比，它能提供峰纯度信因子（matchfactor）4忱春饬浚곆渲涤ꚽ咏ﳓ�100。息；EMARC以标准品的光谱作为参比，不仅提供峰若在色谱峰的不同部位得到的吸收光谱中，吸收最纯度信息，而且提供可能的峰种类。和AR法相比，大值或最小值发生了位移，则证明该色谱峰中有杂MARC法对波长的选择不敏感，对光谱相似性无要质存在。要使杂质含量低于5%，则纯度匹配因子应本文收稿日期：1993年12月27日，

7、修回日期：1994年2月8日求，灵敏度也不依赖于色谱的分辨率。Marr等人测光谱差别不大时，导数色谱能提供足够的信息鉴定定了一个二组分光谱性质极其相似（븰0.99┑这类重叠峰〔눳〕场。Fell等31讨论了导数色谱在HPLC元样品检测限为1%，比AK法的510%低得多。中的应用。Fasanmade32提出了三维导数技术并成两波长的吸光度之比可用两波长下色谱峰的积功地鉴定了乙炔基薅甾ﺴ醇和诺塞甾尥酮的重叠峰。分面积比代替〔〕。White等〔〕发现用峰高之比更2.5其它方法准确。Castledine等〔〕发

8、现用峰面积之比能克服噪并列检测器也可用于测定有重叠峰的样品。N音及峰前沿和尾部吸收比的不准确性带来的影响。个重叠组分至少需要N个不同的检测器33ꍂBlank2.3光谱抑制法（Spectralsuppression简称SS）等31曾利用重叠组分的氧化电位不同，采用双重电光谱抑制法是吸收比法的进一步发展，本法测化学检测器分析了HPLC重叠峰。定二波长的信号差A，并以A对分析时间t作图3化学计量垦学方法得到差示色谱。纯物质应为零信号，杂质则将产生非零偏差〔〕。