实验八 植物激素对植物形态建成的作用.ppt

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1、实验八植物激素对植物形态建成的作用植物生物学实验-植物生理部分【实验原理】植物各器官的分化，首先是细胞的极化过程。植物体的每一个细胞都由受精卵分裂而来，即使高度分化的细胞也保留着遗传上的全能性，即在每一个细胞中包含着产生一个完整有机体的全部基因。早在五十年代Skoog和崔瀓就已发现在烟草组织培养中，激动素和生长素在愈伤组织产生和分化中的相互作用。愈伤组织的大量产生需要有生长素和激动素。生长素／激动素的比率高时，诱导产生根；生长素／激动素的比率低时，产生芽；在二者的比例居间时，愈伤组织占优势。【实验目的】理解植物激素对植物形态建成作用的重要性。了解生长素／激动素比率的变化

2、是决定诱导根、芽和愈伤组织形成的关键因素。【实验材料】生长健壮的烟草植株【实验器材】⑴烧杯;⑵搅棒;⑶容量瓶;⑷量筒;⑸移液管;⑹三角瓶;⑺培养皿;⑻超净工作台;⑼培养室;⑽冰箱;⑾天平;⑿高压灭菌锅;⒀镊子;⒁手术刀;⒂手术剪;⒃酒精灯;⒄滤纸;⒅铝箔。【实验步骤】(1)愈伤组织诱导培养基（RM-1965）①称取琼脂10克，放入盛有约500mL蒸馏水的量程为1升的烧杯中，加热溶解（注意加水体积不要太多）。②逐一加入(1)~(10)母液各10mL，边加边搅拌。③称取蔗糖30克加入烧杯中，搅拌均匀后加蒸馏水至1000mL。④用1MNaOH调pH为5.6-6.0。⑤把溶液装

3、入三角瓶，每瓶25mL，于高压灭菌锅中1.05MPa(121℃)蒸气压力下灭菌15~20分钟，冷却后备用。(2)分化培养基除生长素和激动素按后面浓度比例加入外，其它与RM-1965培养基中成份相同。共分六个处理，各处理重复四个以上。调pH至5.6-6.0之间，分装及灭菌与诱导培养基相同。编号生长素浓度（mg/mL）激动素浓度（mg/mL）100200.2320420.2520.0260.022愈伤组织的诱导(1)茎段的消毒：取高约2尺的烟草植株地上部分，去顶，去叶，切成约7cm长的小段，用70％乙醇浸泡3min，无菌水冲洗一遍后，用10％安替福民浸泡5min，更换新的安

4、替福民溶液再浸泡5min，然后用无菌水冲洗5次，置无菌培养皿中备用。(2)烟草髓的制备：在无菌条件下于超净工作台上，用最小号打孔器小心的将烟草髓组织取出(可用小玻璃棒退出)。然后用手术刀将髓两端切去各0.5cm，再将中间一段切成2mm左右的小圆片(注意烟草形态的上下方向)。(3)接种：用长柄镊子向每个三角瓶中接入髓片三个，使形态学的下端朝下，用铝箔纸包上瓶口。(4)培养：置培养室中，28℃人工光照条件下培养。器官的再分化在无菌条件下将诱导出(约3~4周)的烟草愈伤组织，用手术刀小心的切成2×2×2mm3的小块，用长柄镊子转接于分化培养基中，置28℃培养室中人工光照培养，

5、记录生长变化情况，五周后总结观察结果。结果记录(1)愈伤组织出现的时间。(2)芽和根出现的时间。(3)统计根、芽及全苗数。【注意事项】1.整个实验过程都需无菌操作。2.接种时烟草叶片的形态学下端朝下放置在培养基上。【思考与作业】1.培养基中加入的蔗糖对愈伤组织的生长起什么作用？2.实验中除培养基需高压灭菌外，还有哪些实验用品需无菌处理？3.不同浓度比例的IAA和激动素对愈伤组织的诱导及其分化有何影响？4.实验材料烟草髓片接入瓶中时，要求形态学下端朝下，为什么？