原发性骨质疏松动物模型组织胶原蛋白及蛋白多糖含量变化的研究

《原发性骨质疏松动物模型组织胶原蛋白及蛋白多糖含量变化的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、南昌大学学报(医学版)2010年第50卷第5期JournalofNanchangUniversity(MedicalScience)2010，Vo1．50No．529原发性骨质疏松动物模型组织胶原蛋白及蛋白多糖含量变化的研究赵良军，汤晓正，熊龙，彭芬芬，庄薇。(1．江西省人民医院骨科；2．南昌大学研究生院医学部2008级，南昌330006)摘要：目的通过测定大鼠膝关节软骨胶原蛋白及蛋白多糖含量，探讨骨质疏松与膝关节退变的关系。方法将雌性SD大鼠5O只，按随机数字表法分成2组。实验组(一25)于实验开始1周内

2、摘除双侧卵巢，对照组(一25)同样手术方式切除背部部分脂肪组织。采用微量羟脯氨酸测定法、硫酸一咔唑法测定2组大鼠膝关节软骨及前交叉韧带中胶原和蛋白多糖含量。结果实验组膝关节软骨胶原蛋白(42．7±2．4)mg·g_。、蛋白多糖(29．5土2．1)mg·g含量明显低于对照组[(47．4土3．1)、(35．3±2．8)mg·g～，P<0．o51；实验组膝关节前交叉韧带中胶原蛋白(34．2±2．5)mg·g-。、蛋白多糖(24．9士1．3)mg·g含量明显低于对照组[(41．5士2．9)、(30．3±1．7)mg

3、·g-。，P

4、15rain，冰上冷却后酶标仪测定定大鼠膝关节软骨及前交叉韧带组织中胶原蛋白及A560的值。蛋白多糖含量，探讨原发性骨质疏松症与膝关节退2)待测液的制备：将标本常规脱脂，置于60℃变性改变的关系。恒温箱干燥，取样品10mg，加入EP管中研磨碎，加入0．3mL蒸馏水、6tool·L盐酸0．3mL离心均1材料与方法匀。用针头在EP管盖上扎一小孔，置入120℃高压1．1实验分组与准备锅中水解2h。取出后40NaOH调pH值至6．0，用选用体质量200~250g、9～10月龄雌性SD大蒸馏水稀释至1．5mL，120

5、00r·min离心15min。鼠5O只，由南昌大学医学院实验动物科学部提供取上清液用水稀释3～6倍即可作为样品直接测(合格证号：FU0516034)。将SD大鼠按随机数字定[1]，按标准曲线方法进行。按校正曲线，计算Hyp表法分成实验组和对照组，每组25只。2组摄食及百分含量，再按Grant的方法，计算胶原百分含量一饮水等饲养条件一致，月龄及体质量比较，差异无统Hyp×7．46。计学意义(P>O．05)。实验组于实验开始1周内摘1．3蛋白多糖测定除双侧卵巢，对照组同样手术方式切除背部部分脂1)标准曲线制备：

6、分别取标准溶液0．00、肪组织，2组大鼠饲养16周后以腹主动脉放血法处0．05、0．10、0．15、0．20、0．25mL于带塞试管中，用死大鼠，取大鼠膝关节软骨及前交叉韧带。蒸馏水补加至0．25mL。在冰浴中预冷后加入浓硫1．2胶原蛋白的测定酸1．5mL。振摇混合，在100℃水浴中加热1)标准羟脯氨酸曲线的制定：取标准待测液5rain。冰浴冷却至室温后，加入25L咔唑溶液。5OL，加入0．05tool·LGuS04溶液25L，1O摇匀后，在520nm处测定光吸收值，以“O”管作为NaOH溶液25L，再加入

7、6双氧水溶液25L，置空白对照-2]。于6O℃水浴10min，其间振荡。加入无水乙醇2)待测液制备：将标本常规脱脂、脱水，取10mg收稿日期：2010—03—22通信作者：汤晓正，主任医师，E-mail：nanchang2006@yahoo．cn。30南昌大学学报(医学版)2010年5月，第5o卷第5期样本置5mL试管中制成匀浆，加入木瓜蛋白酶溶液织提供良好的水合空间。蛋白多糖聚合体是核心蛋0．25mL，60℃水浴消化7h。冷却至室温后加入白和糖氨聚糖链共价连接聚合而成，对维持胶原纤20TCA0．25mL，

8、室温放置2h后离心维排列的有序性、防止胶原纤维的降解、维持细胞表(3500r·min)5min。取上清液25肚L，用蒸馏型、传递信息具有重要作用]。蛋白多糖与其他基水稀释成2．5mL，取其中的0．125ml配成待测质问相互作用，阻止细胞基质的钙化，使软骨及韧带液，按标准曲线方法进行操作。组织富有弹性，在保持软骨及韧带组织整体功能方1．4统计学方法面发挥着极其重要的生物学作用[4]。采用SPASS10．0统计软件对