原发性骨质疏松动物模型组织胶原蛋白及蛋白多糖含量变化的研究

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1、万方数据南昌大学学报(医学版)2010年第50卷第5期JournalofNanchangUniversity(MedicalScience)2010，V01．50No．529原发性骨质疏松动物模型组织胶原蛋白及蛋白多糖含量变化的研究赵良军1，汤晓正1，熊龙1，彭芬芬2，庄薇2(1．江西省人民医院骨科；2．南昌大学研究生院医学部2008级，南昌330006)摘要：目的通过测定大鼠膝关节软骨胶原蛋白及蛋白多糖含量，探讨骨质疏松与膝关节退变的关系。方法将雌性SD大鼠50只，按随机数字表法分成2组。实验组(挖=25)于实验开始1周内摘除双侧卵

2、巢，对照组(，l=25)同样手术方式切除背部部分脂肪组织。采用微量羟脯氨酸测定法、硫酸一咔唑法测定2组大鼠膝关节软骨及前交叉韧带中胶原和蛋白多糖含量。结果实验组膝关节软骨胶原蛋白(42．7士2．4)mg·g～、蛋白多糖(29．5士2．1)mg·g-1含量明显低于对照组[(47．4±3．1)、(35．3士2．8)mg·g_’，P

3、论原发性骨质疏松可引起膝关节组织成分的改变，与膝关节退变关系密切。关键词：原发性骨质疏松；胶原蛋白；蛋白多糖；动物，实验；大鼠中图分类号：R-332文献标志码：A文章编号：1000--2294(2010)05--0029--02骨质疏松症(osteoporosis)系多种原因引起的，以单位体积内骨组织量减少为特点的代谢性骨病变。本研究通过建立原发性骨质疏松动物模型来测定大鼠膝关节软骨及前交叉韧带组织中胶原蛋白及蛋白多糖含量，探讨原发性骨质疏松症与膝关节退变性改变的关系。l材料与方法1．1实验分组与准备选用体质量200～250g、9～1

4、0月龄雌性SD大鼠50只，由南昌大学医学院实验动物科学部提供(合格证号：FU0516034)。将SD大鼠按随机数字表法分成实验组和对照组，每组25只。2组摄食及饮水等饲养条件一致，月龄及体质量比较，差异无统计学意义(P>O．05)。实验组于实验开始1周内摘除双侧卵巢，对照组同样手术方式切除背部部分脂肪组织，2组大鼠饲养16周后以腹主动脉放血法处死大鼠，取大鼠膝关节软骨及前交叉韧带。1．2胶原蛋白的测定1)标准羟脯氨酸曲线的制定：取标准待测液50弘L，加入0．05mol·L_1GuS04溶液25弘L，10％NaOH溶液25肛L，再加入6

5、％双氧水溶液25pL，置于60℃水浴10min，其间振荡。加入无水乙醇收稿日期：2010一03—22通信作者：汤晓正，主任医师，E-mail：nanchan92006@yahoo．cn。25弘L，放置20nSn，其间振荡3次；加入6mol·L_1盐酸50弘L，加入5％对二甲氨基苯甲醛50肛L，摇匀后放入50℃水浴15min，冰上冷却后酶标仪测定A560的值。2)待测液的制备：将标本常规脱脂，置于60℃恒温箱干燥，取样品10mg，加入EP管中研磨碎，加入0．3mL蒸馏水、6mol·L-1盐酸0．3mL离心均匀。用针头在EP管盖上扎一小孔

6、，置入120℃高压锅中水解2h。取出后40％NaOH调pH值至6．0，用蒸馏水稀释至1．5n止，12000r·min-1离心15min。取上清液用水稀释3～6倍即可作为样品直接测定[1]，按标准曲线方法进行。按校正曲线，计算Hyp百分含量，再按Grant的方法，计算胶原百分含量一Hyp％×7．46。1．3蛋白多糖测定1)标准曲线制备：分别取标准溶液0：00、0．05、0．10、0．15、0．20、0．25mL于带塞试管中，用蒸馏水补加至0．25mL。在冰浴中预冷后加入浓硫酸1．5mL。振摇混合，在100℃水浴中加热5min。冰浴冷却至

7、室温后，加入25肛L咔唑溶液。摇匀后，在520nm处测定光吸收值，以“O”管作为空白对照[2]。2)待测液制备：将标本常规脱脂、脱水，取10mg万方数据30南昌大学学报(医学版)2010年5月，第50卷第5期样本置5ⅡlL试管中制成匀浆，加入木瓜蛋白酶溶液0．25mL，60℃水浴消化7h。冷却至室温后加入20％TCA0．25mL，室温放置2h后离心(3500r·min_1)5min。取上清液25弘L，用蒸馏水稀释成2．5mL，取其中的0．125mL配成待测液，按标准曲线方法进行操作。1．4统计学方法采用SPASS10．0统计软件对实验

8、数据进行统计分析，用配对t检验对2组胶原蛋白及蛋白多糖含量进行分析。检验水准：a=0．05。2结果实验组样本中胶原蛋白及蛋白多糖明显低于对照组，2组比较差异有统计学意义(P