一种适用于ssr-pcr的棉花干种子dna快速简便提取方法

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1、分子植物育种，2010年，第8卷，第5期，第981—986页MolecularPlantBreeding，2010，Vo1．8，No．5，981—986技术改进UpgradedTechnology一种适用于SSR—PCR的棉花干种子DNA快速简便提取方法刘峰1’赵佩2徐子初·张娜：1山东省开放式植物组培工程技术研究中心，山东鑫秋种业科技有限公司，德州，253200；2作物生物学国家重点实验室，山东农业大学农学院泰安，271018通讯作者．sdaul06@163．com摘要利用改良的SDS法提取棉花干种子的基

2、因组DNA，所得基因组DNA经分光光度计、琼脂糖凝胶电泳和随机SSR引物扩增效果检测，结果表明利用改良的SDS法直接所提取棉花干种子的基因组DNA，符合棉花SSR-PCR反应对DNA质量的要求。本研究为棉花SSR分析建立了一种快速、简便的干种子DNA提取方法，为SSR标记在棉花遗传育种研究中的应用奠定了基础。关键词棉花，干种子，SDS法，DNA提取，SSR-PCRARapidandEffectiveDNAExtractionMethodfromDryCottonSeedsforSSR．PCRLiufeng‘

3、ZhaopeiXuZichuZhangna1ShandongEngineeringResearchCenterforOpenPlantTissueCulture，ShandongXinqiuSeedScience&TechnologyCo．，Ltd．Dezhou,253200；2StateKeyLaboratoryofCropBiology,CollegeofAgronomy,ShandongAgricultureUniversity,Tai’all，271018Correspondingauthor，sd

4、au106@163．comDOI：10．3969／mpb．008．000981AbstractInthisstudy．animprovedSDSmethodforDNAex仃actionfromcottondryseedswasdeveloped．ThequalityOfDNAobtainedfrom32cottoncultivarswasevaluatedintermsoftheEppendorfBioPhotometeranaly—sis。agarosegelelectrophoresis，andSSR

5、—PCRanalysis．TheresultsindicatedthattheextractedgenomicDNAwasofgoodquality．andcansatisfytheneedofSSR—PCR．ThisrapidandefectiveDNAextractionmethodprovidesafoundationfortheapplicationofSSRincotonheredityandbreedingresearch．KeywordsCoton，Dryseeds，SDSmethod，DNA

6、extraction，SSR．PCRDNA提取是植物分子生物学研究的重要技术wongse等(t993)发明了从水稻和小麦中用半粒种子环节之一，高质量DNA的提取是保证实验结果可提取DNA，Mcdonald等(1994)、Kang等(1998)、魏琦靠性和重复性的关键。最常见的植物提取基因组超等(2009)~Shahzadi(2010)也相继从花生、大豆、DNA的方法是由Rogers等(1985)提出的CTAB法玉米、油菜，金盏花种子中提取了基因组DNA，这些和Dellaporta等(1983)提出的SDS法

7、。但棉花叶片、改良方法的应用表明利用干种子提取DNA是完全种子中富含多酚类物质，而棉花花瓣、纤维中富含可行的。而关于利用干种子提取棉花DNA的报道多糖类物质，增加了DNA提取的难度(孙志栋等，比较少，Krishna等(1997)~1J用SDS法从40mg棉花2004)。不少学者在原有SDS法和CTAB法的基础种子中提取DNA，并利用RAPD引物对其扩增，其上进行了有效的改良(叶磊和王茜，2007；宋国立等，扩增产物进行1．5％琼脂糖凝胶电泳检测，结果表明1998)。孙鑫等(2004)~U用SDS。CTAB结

8、合法提取棉利用棉花种子提取的DNA可以应用于PARD分花总DNA。在植物DNA提取的取材部位上，以新鲜析。沙爱华和张端品(2005)~1J用SDS法提取了棉花幼嫩的叶片为主(Patersoneta1．，1993；ZhangandStew品种华棉101种子中的DNA，并进行琼脂糖凝胶电art,2000)，在植物干种子提取DNA的研究中，Chun泳和随机RAPD引物P262扩增检测，结果表明所ⅥnⅣ．molplant