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1、··生物化学与生物物理进展卜一卜卜一卜卜卜门卜月闷月卜月卜月,月卜月司卜闷卜明卜续宗交住生手尾拿金仑补,十,,,,,「卜,,,,卜,沪胞内抗体技术及医学应用周春水甄水苏中国医学科学院,中国协和医科大学医药生物技术研究所,北京它将单链抗体表达摘要胞内抗体技术是近年来随抗体工程技术发展起来的一项新型基因治疗方法于非淋,、,、巴细胞内并使之定向分布于细胞核细胞浆或内质网等部位特异性阻断干扰分布于该部位的大分子物质生物活性或加工分泌过程实验证明该
2、技术能抑制生长因子受体的表达,灭活原癌基因蛋白,抑制病毒复制在生物科学及医学研究中具有很大应用潜力关键词抗体工程,胞内抗体,单链抗体基因治疗,,胞内抗体们对抗体表达质粒进行了改造将重链与轻链技术川是应用基因重组技术在非淋巴细的信号肤区疏水性氨基酸替换成亲水性氨基,,,胞内表达具有生物活性的抗体并通过对抗体酸这样可使信号肤丧失作用抗体滞留于胞,、又在轻链的信号肤区增加了一个分子进行适当修饰使之定向分布在细胞核浆中,,细胞浆或某些细胞器中从而特异性干扰或
3、阻病毒大抗原的核定位信号!∀用,断分布于该部位的某些生物大分子的活性或加改造后的表达质粒转化细胞以抗独、,,工分泌过程引起细胞的一系列生物过程发特型抗体对转化细胞各组分做免疫检测发现生改变它是继反义、特异性核酶虽然细胞浆是还原性内环境,不利于抗体,、、一显性负突变的组装但所表达重轻链仍然在胞浆中实现,、“”了组装而且经过组装后的抗体在轻链上的核自杀基因等技术之后又一新型基因治疗途径,是抗体工程技术与基因治疗的定位信号引导下
4、由胞浆进入了细胞核川尽结合体体外细胞转化实验证实,胞内抗体可管这些实验证实了抗体能在转化的非淋巴细胞,抑制细胞膜表面受体表达,灭活原癌基因蛋白内表达并且完成组装及定向分布但并没有发,,产物阻碍病毒复制过程〔‘一因此该技术在现胞内抗体具有生物活性的证据这说明细胞研究信号传递、抗肿瘤、抗艾滋病等领域具有浆并不能完全提供要装配成四链完整活性抗体重要应用价值所需全部条件但这些研究开创了一条新的研究方法,即在非淋巴细胞内表达某些具有生物胞内抗体技术的形成与发展,活性的特异性抗体并使它能滞留于细胞内某,,早在年代中期
5、」些部位中以干扰或阻断某些细胞内生物过等就进行程“〕了利用非淋巴细胞表达完整单克隆抗体的研,究,结果发现转化宿主细胞不仅能表达抗体的随着抗体工程等技术不断发展单链抗体一,,的出现使得重链与轻链而且通过蛋白加工分泌系统能组,,〔‘了装出完整抗体,并分泌出胞外随后该研究小胞内抗体技术得到迅速发展抗体分他一一,一一组又进行了表达抗体的胞内定向分布试验收稿日期修回日期生物化学与生物物理进展
6、,一子结构简单由抗体的重链可变区与轻链可变受体的两种胞内抗体,区通过一短肤一,一连接而成分子质和前者对的抑制率要,,一。量左右它基本保持了亲本抗体对抗原低于后者而且在内质网中前者与前,的亲和力基因比较容易获得不仅可以体的复合物被降解的速率要快于后者与用。〔“〕技术直接从某一抗特异性杂交瘤中构前体所形成的复合物,建所需基因而且噬菌体单链抗体库技术为基因的获取提供了丰富的
7、源泉噬菌体杂交瘤十逆转录抗体库是将各种单链抗体基因重组到噬菌体外重链!轻链,壳蛋白基因中以融合蛋白形式表达于噬菌体〔二〕【二皿二〕【二工二〕〔二二】〔〕【习二二,、外壳表面然后利用抗原抗体的特异性结合蛛从嵘,寺于反应即可简便地筛选出针对某一抗原并具有较高亲和力的重组噬菌体,从而获得所需!,基因由于基因结构简单便于体外重组操作,且抗体亲和力较高,目前已成〔‘〕十连接反应为胞内抗体技术最常采取的抗体形式根据胞内抗体所针对的靶分子在细胞内存白
8、从!,蛋白的在或经过的部位对端或端告,进行一些修饰就可将人为地滞留于细酶切插入表达载体、’‘胞核细胞浆或内质网中,实际研究将图内质网滞留型胞内抗体基因构建示意图胞内抗体滞留于内质网中比较多见这是由于、
