顶体蛋白检测试剂盒使用说明

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1、UscnLifeScienceInc.www.uscnk.us;www.uscnk.cn;www.uscnk.comE91947Hu96T顶体蛋白(ACR)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)适用生物：人使用说明书仅供体外研究使用，不用于临床诊断!第7版（2011年11月修订）[预期应用]本试剂盒运用双抗体夹心ELISA法定量测定人精子中ACR含量。[试剂盒内容]试剂名称数量试剂名称数量96孔板(预包被)196孔板覆膜4标准品(液体)2标准品稀释液1×20mL检测溶液A(绿色)1×120μL检测稀释液A(2×)1×6mL检测溶液B(红色)1×120μL检测稀释液B(2×)1×6mLT

2、MB底物1×9mL终止液1×6mL浓洗涤液(30×)1×20mL使用说明书1[需自备的设备及试剂]1、450±10nm滤光片的酶标仪(建议仪器使用前提前预热)2、单道或多道微量加液器及吸头3、稀释样品的EP管4、蒸馏水或去离子水5、吸水纸6、盛放洗液的容器[试剂盒的储存及有效期]1、未开封的试剂盒：所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。请注意，收到试剂盒后请尽快将标准品、检测溶液oA、检测溶液B以及96孔板保存于-20C。有效期为6个月。2、使用后的试剂盒：剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存，开封后的酶标板要加干燥剂后密封保存于o-20C，避免潮湿。注意：试剂盒内酶标条可拆卸，

3、按实验需求可分多次使用；使用后的剩余试剂盒建议在首次实验后1个月内使用完毕。[标本的采集与保存]1、精子制备：筛选收集新鲜精液，置37℃水浴箱，待精液液化，将液化精液转移至离心管中进行离心，转速为2,000×g，离心10-15min，弃精浆，沉淀物中加生理盐水，洗涤、离心，重复3次，保留沉淀，经超声波超声粉oo碎，10-15min高速离心，取上清即可检测，或将上清置于-20C或-80C保存，但应避免反复冻融。注意：ooo1、以上标本均需密封保存，4C保存应小于1周，-20C不应超过1个月，-80C不应超过2个月。2、标本使用前应缓慢均衡至室温，不应加热使之融解。[试剂准备]oo1

4、、使用前将所有的试剂和标本缓慢均衡至室温(18-25C)，试剂不能直接在37C溶解。2、标准品(液体)：每瓶标准品加入标准品稀释液0.4mL，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为10ng/mL。准备7个稀释标准品的EP管，每个EP管中加入250μL的标准品稀释液，如图所示依次倍比稀释成10ng/mL，5ng/mL，2.5ng/mL，1.25ng/mL，0.625ng/mL，0.312ng/mL，0.156ng/mL，标准品稀释液(0ng/mL)直接作为空白孔。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。Tube12345678ng/mL1052

5、.51.250.6250.3120.15603、检测稀释液A及检测稀释液B：用6mL蒸馏水或去离子水将6mL浓检测液A及B稀释至12mL，进行2倍稀释，稀释后的工作液不宜进行冷冻保存。（考虑到实验过程中的试剂损失，试剂瓶中稀释液的量多于6ml，因此在每次实验中，必须用移液器准确吸取实验所需量，并在新的容器中进行倍比稀释。）4、检测溶液A及检测溶液B：DetectionA及DetectionB在使用前请手甩几下或少时离心处理，以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。临用前分别以检测稀释液A或B1:100稀释(如：10μL检测溶液A/990μL检测稀释液A)，充分混匀，稀释前根据预先计算好的

6、每次实验所需的总量配制(100μL/孔)，实际配制时应多配制0.1-0.2mL。5、浓洗涤液：用580mL蒸馏水或去离子水将20mL浓洗涤液稀释至600mL，进行30倍稀释。6、底物溶液：请用灭菌的移液器吸头吸取所需体积的TMB至另一干净容器中使用，容器中剩余的底物应予丢弃，不要倒回TMB瓶中。注意：1、由于标准品为微量液体，肉眼可能无法看到。2、标准品的稀释不能直接在板中进行。3、标准品请于临用前15分钟内配制。该标准品只能使用一次。4、标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请使用相应的稀释液配制，不能混淆。混匀时要轻轻充分混匀，避免起泡。为保证实验结果的准确请使用微量吸管

7、，并校准微量加液器。请依据所需的量精确配制，尽量不要微量配制(如吸取检测溶液A时，一次不要小于10μL)，以避免造成浓度误差。5、请勿重复使用已经稀释过的标准品、检测溶液A工作液和检测溶液B工作液。6、浓洗涤液中如有结晶析出，请先温育至室温，轻轻混匀，至到结晶完全溶解再进行配制。7、试剂盒中部分试剂为储存液，客户需配置成工作液后使用，在配置过程中如因纯净水质量差或水质污染，以及实验中所用耗材洁净度差，可能造成实验结果不准确，甚至完全错误，请使用双蒸水。[标本处理]1、Uscn,I