口腔鳞癌及癌前病变.doc

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1、口腔鳞癌及癌前病变　　作者：殷操，沈丽佳，谢思明，谢立群　　【关键词】热休克蛋白;HSP70;HSP90;口腔癌;口腔扁平苔藓　　【摘要】目的：检测热休克蛋白70，90在口腔鳞癌及癌前病变中的表达情况，探讨其在口腔癌中的作用及其意义.方法：采用SABC法免疫组化方法检测42例口腔鳞癌、22例口腔扁平苔藓、20例口腔白斑、10例正常黏膜中HSP70，90蛋白表达的情况.结果：HSP70在OLP组中主要以阳性和强阳性表达为主，占91%(20/22)，明显高于正常黏膜、口腔白斑和口腔鳞癌组(P<0.05);HSP90在OLP,OSCC组中主要以弱阳性和阳性表达为主，分别占

2、73%(16/22)和70%(14/20)，明显高于正常组和口腔白斑组(P<0.05).结论：HSP70，90在口腔扁平苔藓中均起着一定的作用;同时HSP90可能还参与口腔鳞癌的发生和发展过程.　　0引言　　热休克蛋白(heatshockprotein,HSP)，是一类非常保守的蛋白质分子家族.自从20世纪80年代确定HSP的序列和基因结构位点以来[1]，很多研究发现，HSP在细胞保护、免疫应答、信号转导及调节凋亡等方面具有重要作用，还能诱导细胞毒T淋巴细胞活性，特异杀伤肿瘤细胞.目前有关HSP在口腔鳞状细胞癌(oralsquamouscellcarcinoma，O

3、SCC)及癌前病变中的表达和作用的研究较少，为此，我们通过检测HSP70及HSP90在OSCC及其癌前病变中的表达，探讨HSP70，90在OSCC发生发展过程中的作用.　　1材料和方法　　1.1材料1999/2003年本院手术及活检标本94例(患者术前均未采用化疗、放疗)，其中正常口腔黏膜(normaloralmucosa，NOM)10例，口腔扁平苔藓(orallichenplanus，OLP)22例，口腔白斑(oralleukoplakia，OLK)20例，OSCC共42例，按照其分化程度分为I级20例，II级12例，III级10例.所有标本均经HE染色，并经口腔

4、病理专家确诊.鼠抗人HSP70mAb(浓缩型)、鼠抗人HSP90mAb(浓缩型)均购自DAKO公司，工作浓度分别为1∶300和1∶200.SABC法试剂盒及DAB显色液均购自DAKO公司.　　1.2方法常规石蜡连续切片4μm，常规脱蜡、梯度乙醇水化至水，微波修复，自然冷却至室温.采用SABC法免疫组织化学染色，DAB显色3～5min，苏木素复染5min，盐酸乙醇分化数秒，流水返蓝15min，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片.用TBS代替一抗作为空白对照，已知阳性片作阳性对照.结果在光学显微镜下进行观察.HSP70阳性定位于胞质及胞膜，HSP90阳性定位于胞质，

5、呈黄色或棕黄色颗粒.采用双盲法统计实验结果.随机选取10个高倍视野进行计数，计数阳性细胞所占的百分比，根据阳性细胞的比例分为以下四个等级：<5%为阴性(-)，5%～25%为弱阳性(±)，26%～75%为阳性(+)，>75%为强阳性().　　统计学分析：采用SPSS12.0统计软件包进行统计，因各组指标均为等级资料，故其组间的比较采用非参数秩和检验KruskalWallisTest，检验水准取双侧α=0.05.　　2结果　　2.1HSP70的表达见表1.HSP70在口腔正常黏膜中以阳性表达为主，占70%(7/10)，主要表达在基底层及棘层;在OLP组中主要以阳性和强阳

6、性为主，占91%(20/22)，主要表达在基底层及棘层，固有层淋巴细胞和血管内皮细胞也有阳性表达(图1A).在OLK中以阳性和强阳性表达为主，占90%(18/20).OSCC组中则以弱阳性和阳性表达为主(图1B)，占76%(32/42).各组间经非参数秩和检验KruskalWallisTest，χ2=17.348，P=0.001<0.05，有统计学差异.NOM,OLK,OSCC三组间经非参数秩和检验，χ2=5.058，P=0.08>0.05，差异无统计学意义.将这三组合并为非OLP组后与OLP组相比，χ2=12.948，P=0.000<0.05，有统计学意义，提示H

7、SP70在OLP中表达上调.OSCC各级相比，χ2=0.006，P=0.997>0.05，差异无统计学意义.　　2.2HSP90的表达见表1.HSP90在口腔正常黏膜中以阴性表达为主，占70%(7/10);在OLP组中主要以阳性和弱阳性为主，占73%(16/22).在OLK组中主要以阴性和弱阳性表达为主(图1C)，占70%(14/20).OSCC组中则以弱阳性和阳性表达为主(图1D)，占62%(26/42).各组间经非参数秩和检验KruskalWallisTest，χ2=11.233，P=0.011<0.05，有统计学差异.NOM与OLK相比，χ2=1.091，