诱导不同基因型大豆未成熟子叶体细胞胚胎发生的研究-论文.pdf

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1、作物杂志Crops2012．2诱导不同基因型大豆未成熟子叶体细胞胚胎发生的研究王萍钟影，王恩旭冯远航’王罡季静(。淮海工学院海洋学院，222005，江苏连云港；天津大学遗传工程研究所，300072，天津中国人民解放军92323部队农副业基地，222247，江苏连云港)摘要以未成熟子叶为外植体，研究25种的受体选择奠定理论基础。基因型对大豆愈伤组织形成与体细胞胚胎发生的1材料与方法影响。结果表明，大豆不同基因型间愈伤组织诱导率变化较小，而基因型对体细胞胚胎发生的影本试验以东北地区、华北地区和江淮地区生响较大，依基因型不同体细胞胚诱导率变化在产上主栽25

2、种基因型大豆为材料，大豆种子由吉3．33％～83．33％。体细胞胚诱导率、平均胚数在林省农业科学院大豆研究所、黑龙江省农业科学基因型问的差异均达极显著水平，且两者间存在院大豆研究所、东北农业大学大豆研究所、浙江大极显著相关关系。学农学院等单位馈赠。取粒大饱满、无病的大豆关键词大豆；基因型；未成熟子叶；体细胞种子，4～9月分期播种于中国人民解放军92323胚胎发生部队农副业基地(位于连云港市)试验田。开花20d取未成熟子叶长约3～5mm幼荚，置4qC处理大豆(GlycineMaxL．)是重要的油料作物与植2—5d后取出豆荚在75％乙醇中浸泡2min，0

3、．1％物蛋白来源，利用转基因技术改良大豆的不良遗HgC12处理10—15min，无菌水冲洗2—3次，剥开传性状，可以避开远缘杂交的困难，缩短育种周种皮，去掉胚轴，将子叶近轴面向上接种于体细胞期，已成为大豆育种工作的重要组成部分。然而，胚诱导培养基中25℃暗培养。调查各处理的未成大豆是较难进行组织培养与再生植株的植物，其熟子叶产生愈伤组织的外植体数和出现体细胞胚组织培养受体系统与转化方法匹配具有局限的外植体数，每周记载一次。计算愈伤组织诱导性J，因此不断改进大豆组织培养技术可以提高率、体细胞胚诱导率、平均胚数及其标准误，用大豆转基因效率。在诸多影响大豆

4、组织培养因素SPSS17．0进行方差分析、相关分析及其差异显著中，基因型是重要因素之一。在以大豆未成熟子性检验。叶为外植体诱导体细胞胚胎发生的研究中，也有2结果与分析关于基因型试验的报道J。由于各试验时间不同，所选用的基因型与培养条件不同，试验结果各2．1愈伤组织形成与体细胞胚胎发生异，本课题组已研究了大豆不同基因型对诱导胚25种基因型大豆未成熟子叶分别接种于体细尖不定芽的影响。本试验选用东北地区、华北胞胚诱导培养基中培养21d时，愈伤组织诱导率、地区和江淮地区生产上栽培的25种基因型大豆，体细胞胚诱导率和平均胚数及其标准误见表1。以未成熟子叶为外植

5、体，研究基因型对未成熟子从表1可见，不同基因型未成熟子叶的愈伤叶诱导愈伤组织和体细胞胚胎发生的影响，以期组织诱导率变化不大，在49．26％一100．00％之从来自于不同地区大豆基因型中筛选出易于进行间，平均为95．28％。除黑农35(49．26％)、黑农组织培养的大豆基因型，进一步为大豆遗传转化44(93．33％)、黑农51(79．55％)、吉林30作者简介：王萍，教授，主要从事生物技术与植物转基因研究(96．97％)、四粒仓(66．14％)、泗豆4(96．67％)基金项目：国家转基因生物新品种培育重大专项(2009ZX08010—6种基因型外，其他

6、基因型的愈伤组织诱导率均为013B)收稿日期：2011—12—02；修回日期：2011—12—07100％。体细胞胚诱导率、平均胚数在基因型间变652012．2作物杂志Crops4muH"加大豆未成熟子叶愈伤组织诱导率、体细胞化较大，体细胞胚诱导率变化在3．33％～胚诱导率和平均胚数83．33％，平均为43．11％，其中吉林20表现最优，序号基因型愈伤率体细率平数为83．33％；东农小粒豆的体细胞胚胎发生率最合丰25100．O0±0．000053．95±8．67431．60±0．2106低，为3．33％。体细胞胚诱导率超过50％的基因合丰35100．

7、O0±0．000033．33±6．66671．50±0．2500型有10个，占40．00％。各基因型的平均胚数为鸟农28100．O0±0．000064．63±4．81941．90±0．1073黑农3549．26±14．549317．04±2．96331．75±0．43300．67—4．34个，平均为1．98个。总之，基因型对黑农37100．O0±0．000036．19±6．91732．42±0．8207大豆未成熟子叶的愈伤组织诱导率影响较小，体黑农40100．O0±0．000021．56±5．32571．83±0．1667细胞胚胎发生对基因型有明显的

8、依赖性。黑农4493．33±6．666762．59±8．12362．39±0．27722．2愈伤组织形成与体