中原黄牛ghr基因5＇端pcr-rflp多态性分析

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1、中圈羁冲·2010·8·科技·1·中原黄牛GHR基因5’端PCR—RFLP多态性分析张黎鑫，殷宗俊，陈宏权，王力生(安徽农业大学动物科学系，合肥230036)中图分类号：$823文献标识码：A文章编号：1004—4264(2010)08—0001—03摘要：本文采用两种限制性内切酶(Cfrl3I和5I)对我国中原黄牛生长激素受体(GHR)基因5’端部分序列进行PCR—RFLP分析。结果表明：在Cfr13I酶切位点上。GHR基因有CC、CT、1丫r三个基因型，C等位基因频率为0．829，T等位基因为0．171，检验表明在此位点符合Hardy-Weinberg平衡，多态信息含

2、量为0．236；在5I酶切位点上，GHR基因有CC、CT、Tr三个基因型，C等位基因频率为0．849，T等位基因为O．15l，x检验表明在此位点符合Hardy—Weinberg平衡．多态信息含量小、为0．229。关键词：中原黄牛：GHR基因：PCR—RFLP生长激素受体(GHR)是泌乳刺激素受体和生长激内GHR基因5’端的遗传变异．试图找到一些多态位点，素受体超家族成员之一．是具有620个氨基酸残基的跨为中原黄牛乳肉兼用品系选种提供依据。膜糖蛋白．其胞外区能与生长激素(GH)结合并通过胞1材料和方法质区进行信号转导。牛的生长激素受体(bGHR)基因，1．1实验动物被定位在

3、20号染色体。由1O个外显子、9个内含子组成。以来自安徽毫州天达集团核心牛场及周边散户的GHR基因碱基序列的突变可能导致其结构及功能的126头中原西门塔尔杂交2代黄牛为实验动物。所采集改变．进而影响到信号转导及GH作用的生理效应．从的实验牛健康状况良好．品系特征明显，系谱清楚，年龄而影响到产奶、产肉等许多性状。因此，将bGHR基因集中在4月龄+15d，个体间无亲缘关系。利用颈静脉采作为候选基因来研究其与生产性状的关系，对牛的育种血，柠檬酸葡萄糖溶液(ACD)抗凝，一20~C保存备用。有很大实践意义『1I2】1．2主要仪器乳肉兼用是现代牛种选育的方向。一些经济发达的Flex

4、igene型PCR仪(Techne公司)；凝胶成像系统国家多以“乳肉兼用型”为主．母牛挤奶．公牛肥育屠(上海天能)：WH一3微型漩涡混合仪(上海沪西分析仪宰。中原地区黄牛属于役用品种，体积较小，生长缓慢，器厂)：WD-9403型紫外分析仪(北京六一仪器厂)；可调专门化程度很低本课题以西门塔尔牛为级进杂交体．式移液器一套(Thermo科技有限公司)。应用开放核心群育种原理．选育出生长性能优良的乳肉1．3主要试剂兼用牛品系．为中原黄牛改良做出了积极的探索。当地Tris、EDTA、EB等购自Sigma公司。Taq聚合酶、黄牛经过杂交改良．生长速度大大加快．出栏体重明显dNTP、

5、DNAMarker(100～2000bp)、Cfrl3I内切酶、SatI增大．在增加经济效益方面已发挥了明显作用。内切酶及引物购自上海生物工程有限公司。研究和评估新品系的遗传多样性．对于新品系的培1．4试验方法育具有重要意义本试验以GHR基因为候选基因．利用1．4．1基因组DNA的提取及检测PCR—RFLP技术研究中原黄牛乳肉兼用品系后代群体用酚一氯仿方法提取血样基因组DNAt。在紫外分光光度计上测定DNA的浓度和纯度．一20％保存备用。1．4．2PCR—RFLP收稿日期：2010—04—02基金项目：安徽省“十一五”科技攻关项目(06013040A)，国家科技支撑计参考

6、A．Maj[4]等设计的引物。序列如下：划项目(2008BADB2B03)资助。上游引物1：TGCGTGCACAGCAGCTCAACC，下游引作者简介：张黎鑫(1983一)，硕士研究生，研究方向为动物遗传及分子育种。物l：AGCAACCCCACTGCTGGGCAT，目的片段836bp。通讯作者：王力生，副教授。上游引物2：CTGGCGTATGCTC几TGTCA，下游引·2·卞固奶斗·2010·8·物2：TGGTCTTGCTGCTTTCCTAT，目的片段318bp。为中度多态，PIC

7、∑p=∑∑z反应体系均为1UTaqDNA聚合酶、2．5mmol／LMgC12=1l=1j=i+l1．21xL、10xbuffer2．5L、1．0mmol／LdNTPsllxL、100ng基其中：P~I1Pi分别为第和第个等位基因在群fj因组DNA、lOpmol／L上下游引物各1L，补ddHO至的频率．，z为等位基因数利用POPGene软件统计分l20txL。2结果与分析PCR1反应程序：95cc预变性5min，95qC变性20s，2．1PCR扩增产物69℃复性45s．72℃延伸6Os．共36个循环．最后72℃延bGHR5’端P