血红蛋白的粗提取练习题.doc

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1、专题5　DNA和蛋白质技术课题3　血红蛋白的提取和分离一、选择题1使用凝胶色谱法分离蛋白质实验中,相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的行进过程,可表示为图中(　　)。解析:本题考查对凝胶色谱法分离蛋白质原理的理解,相对分子质量较大的蛋白质留在颗粒外面,相对分子质量较小的蛋白质进入颗粒内部;蛋白质相对分子质量大的通过凝胶间隙先被洗脱,蛋白质相对分子质量小的进入凝胶内部而后被洗脱。答案:B2关于凝胶色谱柱的装填,除哪项外均为正确解释(　　)。A.交联葡聚糖凝胶(SephadxG75)“G”表示凝胶的交联程度、膨胀程度及分离范围,75表示凝胶得水值B.色谱柱内不能有气泡存在,一旦发现有

2、气泡,必须重装C.用300mL物质的量浓度为20mmol·L-1的磷酸缓冲液充分洗涤平衡凝胶12hD.凝胶用自来水充分溶胀后,配成凝胶悬浮液解析:本实验中使用的交联葡聚糖凝胶(SephadexG75),其中G表示凝胶的交联程度、膨胀程度及分离范围,75表示凝胶得水值,即每克凝胶膨胀时吸水7.5g;气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序,降低分离效果,因此,一旦发现有气泡,必须重装;在洗脱过程中,应在约50cm高的操作压下,用300mL物质的量浓度为20mmol·L-1的磷酸缓冲液充分洗涤平衡凝胶12h,以使凝胶装填紧密;凝胶溶胀时,应使用蒸馏水将其充分溶胀,制成凝胶悬浮液。答案:D

3、3下列对在凝胶柱上加入样品和洗脱的操作,不正确的是(　　)。A.加样前要使柱内凝胶面上的缓冲液下降到与凝胶面平齐B.让吸管管口沿管壁环绕移动,贴壁加样至色谱柱顶端,不要破坏凝胶面C.打开下端出口,待样品完全进入凝胶层后,直接连接缓冲液洗脱瓶开始洗脱D.待红色的蛋白质接近色谱柱底端时,每5mL收集一管,连续收集流出液解析:打开下端出口,待样品完全进入凝胶层后,关闭下端出口,再用同样的方法小心加入适量的20mmol·L-1的磷酸缓冲液,然后连接缓冲液洗脱瓶开始洗脱。答案:C4使用十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺电泳过程中,不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于(　　)。　　　　　　　　　　　　

4、　　　A.电荷的多少B.分子的大小C.肽链的多少D.分子形状的差异解析:蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带净电荷的多少以及分子的大小等因素,而十二烷基硫酸钠(SDS)可消除净电荷对迁移率的影响,故在此电泳过程中,迁移率只取决于蛋白质分子的大小。答案:B5凝胶色谱分离法分离蛋白质时,凝胶的种类较多,但其作用的共同点是(　　)。A.改变蛋白质分子通过凝胶时的路径B.吸附一部分蛋白质,从而影响蛋白质分子的移动速度C.将酶或细胞固定在凝胶中D.与蛋白质分子进行化学反应,从而影响其移动速度解析:凝胶的种类较多,但每一种凝胶内部都有孔隙。相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时,相对分

5、子质量小的容易进入凝胶内部的通道,路程较长,移动速度较慢。相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部,只能在凝胶外部移动,路程较短,移动速度较快。相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。答案:A6将经处理破裂后的红细胞混合液以2000r·min-1的速度离心10min后,离心管中的溶液分为四层,从上到下的顺序依次是(　　)。A.血红蛋白、甲苯层、脂溶性物质层、沉淀层B.甲苯层、沉淀层、血红蛋白、脂溶性物质层C.脂溶性物质层、血红蛋白、甲苯层、沉淀层D.甲苯层、脂溶性物质层、血红蛋白、沉淀层解析:混合液经离心后,按密度大小排列,在离心管中从上到下的顺序依次是,第1层为无色透明的甲

6、苯层,第2层白色薄层固体是脂溶性物质沉淀层,第3层红色透明液体是血红蛋白溶液,第4层暗红色沉淀物主要是红细胞破碎物沉淀。答案:D7(2011·江苏南通期末)下列关于血红蛋白提取和分离实验中样品处理步骤的描述,正确的是(　　)。A.红细胞的洗涤:加入蒸馏水,缓慢搅拌,低速短时间离心B.血红蛋白的释放:加入生理盐水和甲苯,置于磁力搅拌器上充分搅拌C.分离血红蛋白:将搅拌好的混合液离心、过滤后,用分液漏斗分离D.透析:将血红蛋白溶液装入透析袋,置于pH为4.0的磷酸缓冲液中透析12h解析:对红细胞进行洗涤时,应加入生理盐水,防止细胞破裂;将血红蛋白从红细胞中释放时,需要加入蒸馏水,以

7、便使红细胞破裂释放出血红蛋白;透析时,应将透析袋置于pH7.0的磷酸缓冲液中透析12h。答案:C8在血红蛋白的整个提取过程中,不断用磷酸缓冲液处理的目的是(　　)。A.防止血红蛋白被氧化B.血红蛋白是一种两性物质,需要酸中和C.磷酸缓冲液会加速血红蛋白的提取过程D.让血红蛋白处在稳定的pH范围内,维持其结构和功能解析:利用磷酸缓冲液模拟细胞内的pH环境,保证血红蛋白的正常结构和功能,便于分离观察(红色)和研究(活性)。答案:D9下面说法不正确的是(　　)。A.在一定范围内,缓冲溶液能够抵制外