tdz对银杏悬浮细胞生长及次生代谢物的影响

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1、-——48-——江苏农业科学2013年第41卷第11期沈小钟，莫小路，曾庆钱，等．TDZ对银杏悬浮细胞生长及次生代谢物的影响[J]．江苏农业科学，2013，41(11)：48—5lTDZ对银杏悬浮细胞生长及次生代谢物的影响沈小钟。，莫小路，曾庆钱，张现涛(1．广东食品药品职业学院，广东广州510520；2．暨南大学药学院，广东广州510632)摘要：为了考察苯基噻二唑基脲(TDZ)对银杏悬浮细胞生长及次生代谢物的影响，将不同浓度TDZ加入悬浮培养体系中检测悬浮细胞生长率及次生代谢物质。结果表明，TDZ浓度低于0．2~moL／L时对银杏悬浮细胞生长率的影响呈

2、先增大后减小的趋势；在悬浮体系中加入0．1I,~mol／LTDZ能促进细胞二萜类化合物的生成，银杏内酯B干重含量达到0．0083％一0．0107％。表明一定浓度的TDZ对银杏悬浮细胞生长和银杏内酯的生成有促进作用。关键词：银杏内酯；细胞悬浮培养；TDZ中图分类号：Q943．1文献标志码：A文章编号：1002—1302I2013)11—0048—04银杏(砒bilobaL．)别称白果树，是著名的孑遗植物。继代培养后生长旺盛的愈伤组织转移至液体培养基进行悬浮银杏叶含有多种药用次生代谢产物。以银杏黄酮和银杏内酯培养，多次继代后获得稳定的液体培养体系。混合物为主要

3、药用活性成分的银杏叶提取物为《中国药典》1．2方法和《欧洲药典》所收载，在全球已有多年的临床运用历史，其1．2．1银杏愈伤诱导与继代培养(1)愈伤诱导培养：MS制剂被广泛用作预防和治疗缺m性心脑血管疾病⋯，自20世培养基+3mg／LNAA+5mg／LKT+30g／L蔗糖+6．5L纪90年代起，银杏制剂一直是治疗心脑血管疾病的首选天然琼脂粉，将pH值调为5．8，120℃高压湿热灭菌20min，将银药物。现有工业化生产获得银杏活性成分的方法大多是从银杏种胚接种到固体培养基中21—28d诱导愈伤组织。(2)愈杏叶中提取一。已有研究发现，树龄是影响银杏叶中活性伤继

4、代培养：筛选生长力旺盛的愈伤组织，接种到继代培养基成分黄酮和内酯类含量的主要因素，树龄为3年的银杏叶继代生长，继代培养基中KT浓度为2mg／L，其他条件与诱导中银杏黄酮含量最高，树龄超过5年后银杏叶黄酮含量和内培养基相同，继代间隔时间为21～28d。酯含量随着树龄的增大显著下降。另外天然资源的获1．2．2银杏细胞悬浮培养与继代培养悬浮培养及继代培得既受到地区、季节、产量等限制，又大量占有用地；而细胞悬养基：MS培养基+3mg／LNAA+2mg／LKT+30L蔗糖，浮培养生产银杏活性成分具有生长条件可控、周期短、产量大将pH值调为5．8，120oC高压湿热灭

5、菌20min。将生长力旺等优点，既保护了珍贵的药材资源，又满足了人们对银杏产品盛的愈伤组织细胞接种到悬浮培养基中悬浮培养和继代培的大量需求。苯基噻二唑基脲(thidiazuron，TDZ)是一种人工养，继代周期为l8～21d，光照1500—2000lx，转速合成的植物生长调节剂，已被证实可同时起到细胞分裂素和120r／rain，鲜重接种量为20—30L培养基。生长素的作用，将TDZ应用于银杏悬浮细胞的研究仅见11．2．3TDZ对银杏悬浮细胞生长的影响考察不同浓度篇有关黄酮的报道。本研究采用TDZ与植物激素联合应(0．05、0．1、0．15、0．2i．Lmo

6、l／L)TDZ对银杏细胞悬浮培养的影用作为生长调节剂对银杏悬浮细胞进行继代培养，并初步探响，计算生长率。培养前测定接种悬浮细胞重量(先测定培讨了TDZ对银杏悬浮细胞生长特性和次生代谢物的影响，以养瓶重量，再测定接种悬浮细胞后的培养瓶重量，二者相期为银杏产品的深入开发提供参考。减)，培养后测定收获悬浮细胞重量(先测定培养瓶总重量，再测定去除悬浮细胞的培养瓶重量，二者相减)。悬浮培养1材料与方法细胞重量的测定：取悬浮培养细胞过400目滤网，蒸馏水清1．1材料洗，滤纸吸取水分，于60℃下真空干燥至恒重，称重。生长率以银杏种胚为外植体，诱导愈伤组织继代培养，筛选多

7、次计算公式：生长率=(收获悬浮细胞重量一接种悬浮细胞重量)／接种悬浮细胞重量。1．2．4银杏悬浮细胞二萜类化合物的测定提取方法：取银收稿日期：2013—05—07杏悬浮细胞烘干，称15g装入用定性滤纸制作的圆柱状筒基金项目：广东省科技计划(编号：2009A030901011)；广东省自然科中，置于索氏提取器中，加150mL甲醇热回流3h，提取液回学基金(编号：$2011010001294)；广东省广州市珠江新星科技计划收甲醇，加入石油醚萃取，弃去石油醚部分，母液加入乙酸乙(编号：2011J220012)；广东食品药品职业学院科研资助项目(编酯萃取，萃取液回

8、收乙酸乙酯，样品加甲醇定容至10mL，即号：2010YZ002)。