临床医学毕业论文蔗糖酯磷脂脂质体对家兔腹腔巨噬细胞膜磷脂含量的影响.doc

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1、XX大学毕业论文蔗糖酯礎脂脂质体对家兔腹腔巨噬细胞膜磷脂含量的影响2014年6月25日蔗糖酯磷脂脂质体对家兔腹腔巨噬细胞膜磷脂含量的影响作者：陈淑芬，钱士匀，姚震，伍强【摘要】n的：观察蔗糖酯与磷脂组成的脂质体对巨噬细胞膜磷脂含量变化的影响。方法：按不同比例将乙酸异•丁酸蔗糖酯与卵磷脂、鞘磷脂和祖固醇混合，溶于乙瞇屮，然后注入pH7.2的PBS缓冲液屮，制成卵磷脂脂质体及蔗糖酯卵磷脂脂质体。用肝素沉淀法分离血浆屮的LDL,再用铜诱导法进行氧化修饰。将分离纯化的家兔腹腔巨噬细胞与OxLDL共同孵育24h后，加入六种脂质体，继续孵

2、育12〜24h；此外，在OxLDL与巨噬细胞孵育的同时加入脂质体，共同培养24〜36h,结束实验，用钳蓝比色法检测细胞膜磷脂。结果：刚纯化的家兔腹腔巨噬细胞的膜磷脂含量平均为(0.429±0.084)mg/H万个细胞，经与OxLDL共同孵育24h后，其细胞膜磷脂含量增加到(0.717±0.045)陀/百万个细胞(studentt=10.9119,P0.01)。在巨噬细胞从OxLDL'P充分摄取了胆固醇后，加入六种脂质体作用12、24h后，各组细胞的膜磷脂均低于荷脂细胞(或泡沫细胞)的膜磷脂含量(F值分别为2.9252、7.19

3、16,P0.05),而与刚纯化的巨噬细胞膜磷脂含量差异无统计学意义(F值分别为0.3444、0.2000,P0.05)；巨噬细胞与各种脂质体及OxLDL共同孵育24〜36h后，经两种卵磷脂脂质体作用过的细胞的膜磷脂含量高于经四种蔗糖酯卵磷脂脂质体作用过的细胞，其屮含鞘磷脂的磷脂脂质体(EPCI)作用过的细胞，膜磷脂含量虽高于四种蔗糖酯脂质体作用过的细胞，但差异无统计学意义(P0.05),而不含鞘磷脂的磷脂脂质体(EPCII)作用过的细胞，膜磷脂含量不仅明显高于四种蔗糖酯脂质体作用过的细胞(P0.05),而且明显高于荷脂的或泡沫

4、化的巨噬细胞(t值分别为3.7629、3.2399,P0.01)o结论：巨噬细胞从OxLDL屮摄取胆固醇的同时，OxLDL屮的氧化磷脂可能通过弥散作用，使细胞膜的磷脂含量增高；加入脂质体后，可能因细胞膜与脂质体之间出现了氧化磷脂的浓度梯度，促使氧化磷脂向脂质体弥散，从而使细胞膜磷脂的含量降低。在脂质体与巨噬细胞及OxLDL共存的情况下，膜材与细胞膜组分相近的卵磷脂脂质体，可能通过融合或/和吞噬等方式使细胞的膜磷脂含量增加；蔗糖酯脂质体可能由于结构差异血不能与细胞膜2问进行类似的磷脂转移。【关键词】蔗糖酯；磷脂；脂质体；膜磷脂含

5、量:；肝素沉淀法[ABSTRACT]Objective:Toobservetheeffectsoftheliposomecomposedbysucroseesterandphospholipidsonthemembranephosphatidecontentofrabbitperitonealmacrophages.Methods:Lecithinandthesucroseesterphospholipidsliposomewerepreparedusingtheethyletherinjectionmethodbymixin

6、gsucroseesterwithlecithin,sphingomyelinandcholesterolaccordingtodifferentlipidsratio.PlasmaLDLwasseparatedbyheparinprecipitationandoxidativelymodifiedbycopperionstoformoxidizedlowdensitylipoprotein(OxLDL).TherabbitperitonealmacrophageswereincubatedwithOxLDLfor24hour

7、sfollowingbyaddingsixkindsofliposometocontinueincubationfrom12to24hours,andthenthemembranephosphatidecontentwasdetectedbymolybdenumbluecolormctricmethod.Inanothercase,thesixkindsofliposomewereaddedatthesametimewhenthemacrophageshavebeingincubatedwithOxLDLfrom24to36h

8、ours,thenmembranephosphatidecontentwasdetected.Results:Theaveragemembranephosphatidecontentofmacrophagespurifiedfromrabbitabdominalcavityw