r2工程细菌纤维素酶酶活影响条件初探

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1、第52卷第l8期湖北农业科学Vo1．52No．182013年9月HubeiAgriculturalSciencesSep．，2013R2工程细菌纤维素酶酶活影响条件初探王万能，张潇骏，吕婧，周见，黄正斌(重庆理工大学药学与生物工程学院，重庆400054)摘要：以3，5-二硝基水杨酸(DNS)法测定纤维素酶活力，研究了不同浓度的表面活性荆(Tween80)、不同缓冲液、不同pH对R2工程细菌纤维素酶酶活的影响。结果表明．在35℃、Tween80浓度为1．6％、醋酸一醋酸钠缓冲液pH4．8的条件下纤维素酶酶活最高，是对照的1．47倍。关键词：纤维

2、素酶；Tween8O；pH；表面活性剂；缓冲体系中图分类号：Q935文献标识码：A文章编号：0439—8114(2013)18—4486—03InfluencingFactorsAnalysisonActivityofEngineeredBacteria112CellulaseWANGWan—neng，ZHANGXiao-jun，Lt)Jing，ZHOUJian，HUANGZheng—bin(SchoolofPharmacy＆Bioengineering，ChongqingUniversityofTechnology，Chongqing400

3、054，China)Abstract：Inordertomakebe~eruseofcellulase，theenzymereactionconditionsonengineeredbacteriaR2cetlulasewereresearched．Theimpactofdiferentsurfactantconcentration，bufersolutionandpHoncellulaseactivityweredetectedbyDNSmethod．Theoptimumconditionswereconfirmed，whichwasat3

4、5℃，concentrationofTween801．6％andacetate，sodiumacetatebuferwithpH4．8，andthecellulaseactivitywas1．47timesofthecontrast．Keywords：cellulase；Tween80；pH；surfactant；buffersolution纤维素是地球上数量最大的可再生资源．也是(IPTG)、羧甲基纤维素钠(CMC)、Tween80、3。5一二地球上分布最广、含量最丰富的碳水化合物⋯。纤维硝基水杨酸(DNS)、苯酚、CuSO4·5H2O、C

5、aClz"6H20、素是经B一1，4葡萄糖苷键连接而成的直链高分子，ZnSO4·7HO、葡萄糖均为分析纯；R2工程细菌由重具有很强的结晶性．糖苷键能通过酶的催化作用发庆理工大学药学与生物实验室提供[8]生水解可以通过纤维素酶系来分解纤维素．使之TGL一16M高速台式冷冻离心机f长沙湘仪离心转变为可被利用的D一葡萄糖．再进一步发酵为酒机仪器有限公司)；UV一2450紫外可见光光度计(优精，对开发新能源具有重要的意义。尼科仪器有限公司)；C型玻璃仪器气流烘干器(长纤维素酶酶解反应过程主要受到温度和DH_3']城科工贸有限公司)；FE20实验室pH

6、计(梅特勒一等多方面因素的影响．同时表面活性剂可以使高托利多仪器有限公司)：BS110S电子天平(北京赛分子聚合物变成复杂的亲水性化合物．使纤维素与多利斯仪器系统有限公司)：DZF一6051真空干燥箱纤维素酶有效结合．从而提高纤维素酶的酶解效(上海越众仪器设备有限公司)。率[5-73。试验将表面活性剂、缓冲液和pH对纤维素1．2方法酶酶活的影响进行了研究．以期得到纤维素酶适宜1．2．1R2工程细菌纤维素酶的分离纯化将R2的酶解条件，更高效地转化和利用纤维素。工程细菌在LB培养液中培养48h后经IG诱导，将诱导后的培养液于5℃、5000r／mi

7、n离心301材料与方法min．收集沉淀．往沉淀中加人10mL磷酸氢二钠一1．1材料及仪器柠檬酸缓冲液(pH4．8)，超声波破碎(功率300W，卡那霉素、异丙基一B—D一硫代吡喃半乳糖苷间歇5s，99次)。取一小滴菌液于载玻片上。草酸铵收稿日期：2013—01—18基金项目：重庆市高校优秀成果转化资助项目(kjzhll216)；重庆市教委科学技术研究项目(KJ120811)作者简介：王万能(1971一)，男，四川开江人，教授，博士，从事生物活性物质和基因工程的研究工作，(电话)023—62563186(电子信箱)wannengw@equt．ed

8、u．cn。第l8期王万能等：R2工程细菌纤维素酶酶活影响条件初探4487结晶紫染液染色，显微镜下观察破碎情况．直至无完整细胞。将完全破碎后的菌液装入离心管．5℃．3