27株嗜水气单胞菌致病性及eric—pcr指纹图谱分析

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1、第36卷第1期福建水产Vo1．36No．12014年2月JournalofFujianFisheriesFeb．2014文章编号：1006—5601(2014)01—0014—0727株嗜水气单胞菌致病性及ERIC—PCR指纹图谱分析吴斌，樊海平，邓志武，林煜，钟全福，曾占壮，肖丹(1．福建省淡水水产研究所，福建福州350002；2．福建省顺昌县水产技术推广站，福建福州353200；3．上海海洋大学水产与生命学院，上海，201306)摘要：从福建省淡水养殖鱼类体内分离到27株嗜水气单胞菌，根据嗜水气单胞菌16SrDNA基因和气溶素

2、基因(aerolysin)的保守序列，设计2对引物，对所分离到的27株嗜水气单胞菌进行双重PCR扩增，扩增结果表明，其中18株为含有Aer毒力基因的潜在致病性嗜水气单胞菌，占总菌数的66．67％。应用ERIC-PCR分型技术对27株嗜水气单胞菌菌株进行分析，以相似度54．00％为限，所有菌株可分为I和Ⅱ两大聚类，以76．00％相似度为界，27株嗜水气单胞菌可分为11个聚类，同一个聚类中菌株分离区域基本相同。分析结果表明，分离的嗜水气单胞菌基因型的多样性和分离地域具有一定的关联，也表明ERIC-PCR可以有效应用于嗜水气单胞茵分子流

3、行病学调查。关键词：嗜水气单胞菌；ERIC-PCR分型；分子指纹图谱；16SrDNA基因；气溶素基因(Aer)中图分类号：S917文献标识码：A嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila)隶属药性等方面具有重要的意义。钱冬实验结果于气单胞菌科(Aermonadaceae)气单胞菌属认为，o：TPS一30，0：PBJS一76是浙江及南(Aeromonas)，为人、畜及水生动物共患的条件方各省致病性嗜水气单胞菌的主要血清型。董传致病菌⋯。该菌广泛存在于水环境中，作为水甫等研究表明福建鳗源气单胞菌分离株主要中的固有菌群，是淡水

4、养殖鱼类出血性败血症、分布于O：Ah10501，O：YT一1，O：CQ一1，皮肤溃疡、肠炎等疾病的病原菌，由于它具有宿O：CHS一3四种优势血清型；樊海平鉴定出主范围广、感染力强、死亡率高等特点，严重危分离自福建省的日本鳗鲡体表溃疡病病原菌株害淡水鱼类的健康养殖。JS70322NA，属于国内鱼类暴发性流行病的优势嗜水气单胞菌血清学复杂，地缘差异、宿主血清型O：9。卢强建立了嗜水气单胞菌的来源、养殖水体等因素常导致基因型的特异性。RAPD指纹图谱，分析相互间的遗传距离，将不因此，针对嗜水气单胞菌进行分型研究，对于分同来源的9株嗜水气

5、单胞菌分型，明确菌株可分析不同来源菌株的流行病学特征、致病特点、耐为3个特征组。收稿日期：2013—10—08基金项目：现代农业产业技术体系建设专项资金(CARS一46—35)资助．作者简介：吴斌(1978一)，男，硕士，高级工程师，主要从事水产动物病害分子免疫学研究E—mail：wubinfire@126．COrn，TeL：0591—83732007．通讯作者：樊海平，男，硕士，研究员，E—mail：fanhaipingl6@163．corn，Tel：0591—83796968第1期吴斌等：27株嗜水气单胞菌致病性及ERIC—P

6、CR指纹图谱分析15基于PCR技术开展细菌DNA指纹图谱分型1材料与方法能客观地反应物种基因水平的差异，相比较于形态学、生理生化特征、血清学分型，更能反映出1．1试剂与培养基生物群体间本质的差别与内在的联系。肠杆菌基PCR所用buffer，dNTP，ExTaq酶，DNA因间重复共有序列(enterobacterialrepetitivein-Marker均购自大连TAKARA宝生物公司；引物tergenicconsensus，ERIC)高度保守，在不同种合成由上海鼎安测序公司完成；细菌基因组属细菌间染色体上的位置和拷贝数不同，是细

7、菌DNA提取试剂盒为OMIGA公司产品；API20E菌株遗传变异的特征性标记之一，ERIC—PCR细菌鉴定试剂盒购自法国生物梅里埃股份有限公指纹图谱分析，可应用于细菌的分子分型和菌株司；普通营养琼脂培养基、RS培养基、液体普间亲缘关系的研究。本文针对分离自福建省通营养培养基购自北京陆桥公司。淡水养殖鱼类的27株嗜水气单胞菌菌株进行I．2菌株来源16SrRNA，Aer基因分子鉴定，以及应用ERIC27株分离菌株为近年福建省主要淡水养殖—PCR方法进行菌株间亲缘关系与多样性分析。鱼类病害调查分离株，分离株参照嗜水气单胞菌旨在明确分离菌

8、株的致病性与菌群特征，为福建的国家标准(GB／T18652—2002)，经形态学与省淡水鱼类嗜水气单胞菌病的分子流行病学调生理生化试验，鉴定为嗜水气单胞菌。详见查、疫苗制备的菌种选择、病原检测等提供基础表1。数据。表1菌株说明Tab．1Dataof