xpertmtb／rif在我国的应用前景

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1、实用医学杂志2013年第29卷第23期3799XpertMTB／RIF在我国的应用前景夏辉赵雁林我国是全球22个结核病、27个耐多药结核病(MDR．95％的利福平耐药菌株在rpoB基因81bp区域(RRDR)存TB)高负担国家之一WHO估算⋯2012年我国结核病患在基因突变。相反，利福平敏感菌株在此区域极少发生基病人数约为140万(患病率为99／10万)。2007—2008年全因突变。为此人们对如何准确、快速、简便检测RRDR基因国结核病耐药性基线调查[]显示，涂片阳性肺结核患者突变的方法学进行了卓有成效的探索[6-8]，但是这些检测方中MDR—TB

2、率和广泛耐药(XDR—TB)率分别为10．2％和法操作往往比较复杂，且存在目前尚未很好得到解决的实0．7％，这极大地增加了我国结核病控制的难度，其中耐药验室污染问题。难以在临床实验室尤其是基层实验室推广结核病的准确、快速实验诊断则是必须着力解决的基础性应用。问题。目前XpertMTB／RIF在其他国家应用的效果较好如1结核瘸实验室诊断现状Boehme等[9]的一项多中心研究结果显示，以培养为参考标目前我国结核病实验室应用较广泛的方法包括抗酸茵准，XpertMTB／RIF灵敏度为92．2％(675／732)，在涂阳和涂涂片镜检、固体和液体培养、药敏试验

3、等。抗酸茵涂片镜检方阴患者中灵敏度分别为98．2％(551／561)和72．5％(124／法操作简便、快速、特异、经济，因此在结核病控制工作中应171)，特异度为99．2％(604／609)。在涂片阴性培养阳性肺用最为广泛．但其灵敏性较低。固体培养以应用改良罗氏培结核病例中．若再增加1份和2份标本进行XpertMTB／养基或Middlebrook基础7H10培养基居多，灵敏度较涂片RIF检测，灵敏度可分别提高12．6％和5．1％，这样总敏感度镜检高。且价格较低廉，但报告阳性培养结果一般需要可提高至90．2％。在检测利福平是否耐药方面。与比例法3—4周

4、的时间。报告阴性结果则需要8周。液体培养方法药敏试验结果比较，XpertMTB／RIF能够正确判断97．6％不仅可以提高敏感性．还可以缩短阳性结果报告时间．一(200／205)的利福平耐药菌株和98．1％(504／514)的利般为4～10d．报告阴性结果为42d．但其试剂完全依赖进福平敏感菌株。Boehme等呻]又进一步评价了XpertMTBA口且成本较高。至于药敏试验，目前WHO已经推荐了常用RIF在结核高流行地区基层实验室应用的可行性、准确度、实的固体和液体培养基的一线和二线抗结核药物药敏试验方施效果等。以培养为参考标准，XpertMTB／RIF

5、灵敏度为法所需要的药物临界浓度和临界比例[31。但固体培养和液体9o．3％(933／1033)，抗酸菌涂片镜检仅为67．1％(699／培养方法分别需要4周和2周才能报告药敏结果。1041)。涂阴培阳病例中灵敏度为76．9％(296／385)，特异度基于上述提到的现有实验室诊断方法的局限性。所以为99．0％(2846／2876)XpertMTB／RIF检测利福平耐药迫切需要能够快速检测结核分枝杆菌复合群和耐药的新的灵敏度和特异度分别为94．4％(236／250)和98．3％(796／方法和新工具。近些年涌现出了许多基于分子生物学或免810)。同时Xpe

6、rtMTB／RIF在HIV／TB双重感染的病例中疫学的方法．XpertMTB／RIF方法是其中之一。也有较好的表现使用XpertMTB／RIF将涂阴病例开始治2XpertMTB／RIF的评估应用进展疗的时间由原来的56d(39～81d)缩短为5d(2～8d)XpertMTB／RIF(Cepheid公司，美国)试验以半巢式实另外此研究还统计了无法判读的结果．无法判读比例为时荧光定量PCR技术为基础，以rpoB基因为靶基因．采用2．4％(126／5321)，而培养为4．6％(441／9690)6种分子信标同时检测6种探针．其中5个相互重叠的分目前我国对此

7、技术也进行了一些研究。张治国等[n]子探针选择性覆盖rpoB基因利福平耐药决定区(rifampin研究显示以固体培养试验结果作为金标准．XpertMTB／resistance—determiningregion，RRDR)8lbp核心区，以检测RIF方法的敏感度和特异度为95．0％(345／363)和89．6％利福平耐药。另外还设置1个球芽孢杆菌特异探针作为内(147／164)，以传统比例法药敏试验结果为金标准，Xpen对照，对DNA扩增效率及检测效率进行质控。该技术整合MTB／RIF方法检测利福平耐药的敏感度和特异度分别为了基于实时荧光定量PCR检

8、测所需的3个步骤(样品准89．1％(41／46)和96．3％(289／300)。欧喜超等[]研究显示备、扩增