99mtc直接与间接标记膜联蛋白v静脉血栓模型显像质量的比较

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1、查堕兰!旦笪兰堂笙塑!!!!!!!：：!：兰!：丝．3393．99mrlT1C直接与间接标记膜联蛋白V静脉血栓模型显像质量的比较吴大勇，张文艳，边艳珠，胡玉敬，魏强河北省人民医院核医学科(石家庄050051)【摘要】目的探讨利用Tc直接与间接标记的膜连蛋白V(AnnexinV)进行静脉血栓显像的可行性，以及对两者显像质量进行比较。方法通过直接标记法与间接标记法分别得到Tc—AnnexinV与Tc—HYNIC—AnnexinV。将20只家兔随机等分为直接标记血栓组、直接标记对照组、间接标记血栓组及间接标记对照组。两血栓组经手术在下腔静脉放入螺旋铜丝，建

2、立静脉血栓模型，两对照组进行与建模相同过程手术但在下腔静脉不放入铜丝。术后1d直接标记两组注射Tc—AnnexinV，间接标记两组注射Tc—HYNIC—AnnexinV，注射后30、60、90及120min显像，计算两血栓组血栓／本底、血栓／头侧下腔静脉部位放射性计数比值，计算对照组与血栓组血栓对应的下腔静脉部位分别与本底、头侧下腔静脉部位放射性计数比值。两血栓组血栓行HE染色。结果两血栓组10只家兔血栓均呈放射性浓聚影，两对照组下腔静脉未见浓聚。直接标记血栓组血栓／本底、血栓／头侧下腔静脉为4．16±0．19、1．69±0．16，间接标记血栓组为3

3、．92±0．38、1．81±0．08，两者差异无统计学意义(t=一1．388、1．248，P>0．05)。直接标记对照组对应下腔静脚本底、对应下腔静胁头侧下腔静脉为1．60±0．14、0．97±0．05，间接标记对照组为1．604-0．13、0．94±0．10，与各自血栓组数据比较差异有统计学意义(t=24．1、9．4，12．8、14．9，P<0．05)。两血栓组血栓病理显示为新鲜混合血栓。结论Tc—AnnexinV及Tc—HYNIC—AnnexinV均有望成为一种新的静脉血栓显像剂，两者显像质量无明显差别。【关键词】膜连蛋白V；标记方法；静脉血栓；

4、放射性核素显像；家兔深静脉血栓形成(deepvenousthrombosis，DVT)是1材料与方法肺动脉血栓栓塞(pulmonarythromboembolism，PTE)的1．1主要仪器及试剂美国GE公司MillenniumVG主要血栓来源，51％～71％患者下肢DVT会导致SPECT仪，西安志达公司ZD一6000井型计数锝分析PTE⋯，而PTE漏诊率、病死率高。急性静脉血栓主要仪。Mo一Tc发生器(北京原子高科产品)，Annexin为新鲜混合血栓，血栓中自色血栓存在大量活化血小V(BenderMedsystems公司产品)，HYNIC(德国No

5、va板，被活化后的血小板膜表面暴露磷脂酰丝氨酸Biochem公司产品)，Slide—A—lyzer透析卡(美国Hy—(phosphatidylserine，PS)，膜联蛋白V(AnnexinV)能ClonePIERCE公司产品)，快速薄层层析一硅胶纸够与PS特异性的结合。利用放射性核素Tc标记ITLC—SG(美国GelmanScience公司产品)，新华1号AnnexinV便能够进行血栓的显像。AnnexinV的Tc滤纸、硅胶快速层析滤纸(北京师范大学化学院惠标记分直接标记法与间接标记法，直接标记法能够更赠)，分析纯丙酮(天津市富宇精细化工有限公司产

6、好地保护AnnexinV的生物活性，但如标记条件不合品)，分析纯SnC1，(天津市化学试剂三厂产品)，其他适，Tc容易脱落，影响标记物稳定性。间接标记法试剂均为国产分析纯。最常用的是通过联肼尼克酰胺(hydrazinonicotinate，1．2Tc—AnnexinV标记参照文献[4]，在反应瓶HYNIC)将Tc与AnnexinV偶联在一起，理论上键合依次加入AnnexinV、柠檬酸钠葡萄糖缓冲液(ACD溶更牢固，标记物更稳定，但由于引入了双功能螯合剂液)500L、10mg／mL酒石酸钾钠溶液100txL、新鲜HYNIC，Te—HYNIC—Annex

7、inV不女口Tc—AnnexinSnC12／HC1(2mg／mE)溶液10L，振荡摇匀，2～4℃V更接近AnnexinV初始的生物活性。2011年11月至冷藏20min，后加入新鲜高锝酸钠溶液1mL(11102012年5月，本实验分别利用Te—AnnexinV与Tc—MBq／mL)，室温静置反应20min，标记完毕。分别以新HYNIC～AnnexinV对造模术后1d的家兔DVT模型进华1号滤纸为固定相、丙酮为展开剂及硅胶快速层析行显像，对两者显像质量进行比较，探讨两种标记方法滤纸(ITLG—SG)为固定相、生理盐水为展开剂。利用标记得到的Annexi

8、nV静脉血栓显像的可行性及两种双体系测定Tc—AnnexinV标记即刻、室温及37℃恒标记物显像的优缺点。温