新城疫_系病毒不同空斑克隆株生物学测定试验.pdf

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1、新城疫Ⅰ系病毒不同空斑克隆株生物学测定试验王春华（辽宁益康生物制品有限公司辽宁辽阳111000）摘要：新城疫Ⅰ系种毒稀释接种鸡胚成纤维细胞（CEF）单层后覆盖含中性红的1.6%营养琼脂糖，37℃培养至72h，分别挑取大（φ2~3mm）、中（φ1~2mm）、小（φ＜1mm）三种空斑，反复冻融后收获病毒，同样方法空斑克隆三代后，通过SPF鸡胚继代增殖，对收获物进行ELD50、MDT、ICPI测定。结果表明，三种空斑克隆株继代培养物中，中斑毒力最强，大斑次之，小斑最弱；大斑克隆株增殖力最强，中斑次之，小斑最差。关键词：新城疫Ⅰ系病毒；空斑；毒力；增殖力Bio

2、metricstestofthedifferentPlaqueclonestraintoNDⅠstrainvirusWANGChunhua(LiaoningYikangBiologicalProductCo.,Ltd.LiaoyangLiaoning111000)Abstract:NDⅠstrainviruswasinoculatedtotheChickenembryofibroblasts(CEF)monolayerbylimitingdilution,thentheCEFmonolayerwascoveredby1.6%agarosewithneu

3、tralredandwasculturedtoto72hoursat37℃.Theviruswasharvestedthrouhgrepeatedfreezingandthawingafterthethreedifferentplaqueswerepickedoutaccordingtosizefrombigtosmall(φ2~3mm,φ1~2mmandφ＜1mm).TheviruswasproliferatedthroughSPFchickembryofor3passageswiththesamemethod.ThetestresultoftheE

4、LD50,MDTandICPItothelatestharvestvirusshowedthatthevirulenceandthefecundityofthevirusfromthedifferentplaquesweredifferent.Themediumplaquevirulencewasthestrongestandthebigplaqueless,thesmallplaquewastheweakest.Thebigplaquefecunditywasthestrongestandmediumplaqueless,thesmallplaque

5、wastheweakest.Keywords:NDⅠstrainvirus;plaque;virulence;fecundity新城疫（ND）是由副粘病毒引起的一种以呼吸城疫Ⅰ系疫苗主要用于2月龄以上成鸡，接种后可道、消化道粘膜出血为典型临床症状的急性传染以产生坚强免疫力，我国从1952年至今一直大量病，日前主要通过疫苗接种来控制本病的发生，新使用，而种毒的遗传稳定性对疫苗质量影响至关重2010年7月ChinaAnimalHealth中国动物保健11学术研究要。本试验对Ⅰ系种毒在鸡胚成纤维细胞的形成的上存在一定的差异，其中以中斑毒力最强，大斑次大小不同

6、的空斑克隆株经SPF继代，并进行毒力和之，小斑最弱，结果见表1。毒价测定，以期了解其生物学特性，现报告如下。
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1材料和方法 1.1种毒 新城疫Ⅰ系种毒购自中国兽药监察所。1.2实验动物1日龄SPF鸡、10日龄SPF鸡胚，由辽宁益康2.2ELD50测定结果SPF动物中心提供。三种不同大小的空斑克隆株SPF胚继代病毒1.3鸡胚成纤维细胞(CEF)毒价不同，大斑毒价最高，中斑次之，小斑最低，结10日龄鸡胚按常规方法制备。果见表2。1.4病毒克隆与选

7、斑
!"#$取生长良好的CEF单层弃去生长液，接种适
当倍数稀释的新城疫Ⅰ系种毒，37℃吸附1h后，覆 盖最终含1/30000中性红的1.6%199-营养琼脂 糖，培养至72h，以弯头毛细吸管分别挑取典型空斑，大（φ2~3mm）、中（φ1~2mm）、小（φ＜1mm），置于0.5~1mlPBS缓冲液中，-15℃反复冻融3次3小结与讨论释放病毒后，计为一代。以同样方法连续进行空斑3.1新城疫Ⅰ系种毒接种CEF单层后表现为细克隆至三代。胞病变，形成大小不一

8、的空斑，经克隆选择SPF1.5病毒增殖继代增殖后通过测定其毒力和毒价，表明不同将收获后不同形态