西北地区主栽豌豆品种SSR指纹图谱构建-论文.pdf

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1、西南农业学报2012年25卷1期SouthwestChinaJournalofAgriculturalSciencesVDL25No,l文章编号：1001—4829(2012)01—0240—03西北地区主栽豌豆品种SSR指纹图谱构建侯万伟，严清彪，张小田，刘玉皎(青海省农林科学院，青海西宁810016)摘要：采用SSR标记技术对7个西北地区主栽豌豆品种基因组DNA进行扩增，构建了不同品种豌豆的指纹图谱。结果表明，21对不同的SSR引物中有6对扩增出多态性DNA片段，其中I对引物PSAC75可使每一品种具有其自身的特征谱带。因此，SSR技

2、术可从DNA水平鉴别豌豆品种的分子差异，从而为分子标记辅助育种提供技术依据。关键词：豌豆；SSR；指纹圈谱中图分类号：$643文献标识码：AConstructionofFingerprintingMapforSevenPeaCultivarsbySSRMarkerHOUWan-wei，YANQing·biao，ZHANGXiao-tian，LIUYu-j~o(QinghalAcademyofA#cultme＆Forestory，Qj丑ng}，aiXining810016，China)Abstract：ThegenomeDNAofthema

3、incultivatedpeacuhivarsinNorthwestChinawagamplifiedbySSRtoconstructthefingerprint．There—suitsshowedthat6pairsSSRpmer8of21pairscouldamplifypolymo~hicDNAfragments，amongwhichPSAC75couldmakeeverycultivarhaveowndmracterisficspectra．Basedonthis，theSSRtechniquecouldidentifythedi

4、fe~ncesofpeacultivarsintheDNAlevelandpm~dethetechnical鲫pponformolecularmarker-assistedbreeding．Keywords：Pea；SSR；Fingerprinting豌豆(PisumsativumL．)为豆科，蝶形花亚科，豆穿梭育种提供理论基础。豌豆属攀缘草本植物，一年生(春播)或越年生(秋1材料与方法播)，又名麦豌豆、寒豆、麦豆。是世界第四大食用豆类作物【】。宗绪晓等对世界上栽培豌豆资源进1．1材料行了研究，结果显示世界上豌豆种质资源十分丰供试材料及来

5、源见表1。富“o简单重复序列(simplesequencerepeat，1．2方法sSR)分子标记因其具有数量丰富，等位基因变异1．2．1DNA提取取豌豆幼嫩叶片约1g，加液氮多，共显性遗传，DNA质量要求有限，重复性强和对研磨至粉末状，加入装有0．8mLDNA提取缓冲液基因组有较好覆盖性等特点，已广泛应用于不同作[100mMTris(pH8．0)，150mMEDTA(pH8．0)，物与果树中的基因定位、品种鉴定、图谱构建、种子2l00mMNaC1，CTAB2％，PVP2％]的1．5mL离纯度检测及遗传多样性分析等引。本试验采用心管中，6

6、5℃水浴45min，加入等体积氯仿：异戊醇SSR标记技术对7个豌豆品种进行了基因组指纹图(24：1)混匀后12000r／min离心10min，将上清液转入另一离心管中，加入同体积无水乙醇。冰上静谱分析，以期为我国豌豆的分子生物学研究和分子标记育种实践，豌豆资源的挖掘利用及西北地区豌置20min，10000r／min离心5min，弃上清，用75％乙醇清洗沉淀3次，风干后加入400TE溶解，收稿日期：201l—o9一l2一20℃保存备用。基金项目：现代农业产业技术体系建设专项(CARS-09)；青海高原作物种质资源创新与利用国家重点实验室培养

7、基金；青海省1．2．2引物序列2l对SSR引物序列参照Bursfin高校“135高层次人才培养工程”专项J等E12~14J人研究，由上海生工生物有限公司合成。作者简介：侯万伟(1982一)，男，青海湟源县人，助理研究员，硕1．2．3PCR扩增及产物检测SSR—PCR扩增在士，主要从事作物遗传育种研究，Email：houwanwei333@163．corn，·为通讯作者，Email：lyujiao2000@yahoo．con．cn。ModelMG％基因扩增仪上进行。反应体系(20)1期侯万伟等：西北地区主栽豌豆品种SSR指纹图谱构建241表

8、26对豌豆SSR核心引物及其相关信息Table2Thesequencesandtheirrelevantinformationof6STMSprimerpair8selectedforSSRa