山西梨属主要栽培品种est-ssr指纹图谱的构建

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1、山西梨属主要栽培品种EST-SSR指纹谱的构建【摘要】：我国的梨属（PyrusL.）植物种质资源相当丰富，山丙作为梨的主要产区之一也有很多品种。但巾于梨属植物缺乏栽培种的野生种群、梨品种之间的形态差异较小等原因，形成了很多有争议品种，导致现有梨的新品种得不到有效的保护，因而对梨品种进行快速准确的鉴定，对促进我国梨种质资源的利用和品种鉴定具右秉要的意义。（EST-SSR标记充分利用现有的信息数据，避免构建文库及测序而获得标记的繁琐步骤，开发的标记揭示的多态性较高，提供的信息量丰富。该标记己广泛用于物种分类、物种鉴定以及遗传多样性分析等研究中。）本研

2、究选用24个山西梨栽培品种为研究材料，采用EST-SSR分子标记的方法分析梨品种间的遗传多样性，并构建其特有的指纹图谱。实验结果如不：1.采用正交设计筛选、优化及验证梨属植物EST-SSR标记中PCR反应体系及程序。为确定PCR反应的最佳体系，利用正交设计的实验方法，对梨属植物的PCR反应体系进行优化。最终确立梨SSR-PCR最佳的反应体系（10

3、iL）为：1.0

4、LiL10xPCRBufferTaqDNA聚合酶1.4U、Mg2+2.0mmol/L、DNA模板50ng、dNTPsO.lmmol/L、引物0.5（imol/L。此体系在后续实验中得到

5、验证。2.幵发梨属植物EST-SSR标记引物，并进行筛选验证。利用己公布的1752条梨属植物EST序列，选取78对梨属植物的EST-SSR引物。采用这78对引物对24个梨品种进行扩增，共扩增出558个等位位点，其中右30对引物能扩增出336条大小在预期片段范围内，清晰的多态性条带，多态位点百分率达60.2%oPIC值变化范围在0.56-0.91，平均为0.75。其中，引物BRC0003、BRC0004、BRC00010和BRC00044这4对引物可以完全区分24个梨属品种。3.采用EST-SSR标记分析梨属植物的遗传多样性。聚类分析把24个梨品种

6、分为5个类群。沙01和其余品种亲缘关系最远,中梨三号和苹果梨、硕丰梨为一个类群;阿巴特、红茄梨、早熟阿巴特、巴梨为一个类群，都属于西洋梨种；其余15个品种聚为一类。结果显示中梨三号和中华玉梨并不是同一品种，而玉露香梨和库尔勒香梨亲缘关系较近。4.采用EST-SSR标记构建出24个山西梨品种特有的指纹图谱,能够对梨属植物进行鉴定,为建立梨树植物指纹鉴定数据库积累科学依据；利用引物BRC0003、BRC00010和BRC00044构建了24个梨属植物材料的指纹图谱。为了直观方便对每一个梨属植物品种的鉴定，还利用10对核心引物构建了每一个品种的指纹图谱

7、。（这句话还需要推敲，意思不是很清楚）【关键词】：梨引物鉴定EST-SSR【学位授予单位】：山西人学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2013【分类号】：S661.2【目录】：中文摘要8-10ABSTRACT10-121文献综述12-181.1梨属植物概述121.2梨品种鉴定方法12-171.2.1形态学鉴定及应用12-131.2.2细胞学鉴定及应用13-141.2.3同工酶鉴定及应用141.2.4DNA分子标记鉴定及应用14-171.2.4.1RAPD14-151.2.4.2AFLP151.2.4.3ISSR151.2.4.4EST-SSR1

8、5-171.3本研究的目的意义17-182材料方法18-302.1实验材料18-192.2实验方法19-292.2.1提取梨属植物的总DNA19-212.2.1.1配制所需试剂19-202.2.1.2提取流程20-212.2.1.3DNA浓度检测212.2.2EST-SSR引物的设计合成21-262.2.2.1EST-SSR序列的查找212.2.2.2EST-SSR引物合成21-262.2.3PCR反应体系的优化26-282.2.3.1PCR反应体系优化设计26-282.2.3.2PCR扩增及产物检测282.2.3.3最佳反应体系的确定282.2

9、.4聚丙烯凝胶电泳28-292.2.4.1药品制备282.2.4.2聚丙烯酰胺凝胶电泳28-292.2.4.3聚丙烯酰胺凝胶的银染染色292.3数据统计29-303结果分析30-373.1提取的DNA浓度质量检测303.2PCR反应体系的优化30-323.3EST-SSR标记的多态性32-333.424个梨属植物品种鉴定及亲缘关系33-353.524个梨品种指纹图谱构建35-374讨论37-394.1梨EST-SSR标记的开发374.2梨DNA提取及PCR反应体系的优化374.324份梨材料的亲缘关系37-384.4梨品种指纹图谱38-395结论

10、39-40参考文献40-45致谢45-46个人简况及联系方式46-47攻读学位期间取得的研宄成果47-49本论文购买请联系页眉网站。