土荆芥组培根分泌物对大豆根尖细胞的氧化损伤-论文.pdf

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1、2013年5月四川师范大学学报(自然科学版)May，20t3第36卷第3期JournalofSichuanNormalUniversity(NaturalScience)V01．36．No．3土荆芥组培根分泌物对大豆根尖细胞的氧化损伤何兵，王亚男，李安奇，张红，马丹炜(四川师范大学细胞生物学研究室，四川成都610101)摘要：采用生化分析方法，研究了土荆芥根系分泌物对大豆根尖细胞的氧化损伤．结果表明，在土荆芥组培根分泌物处理下，大豆根尖细胞0’一和H。O水平升高，丙二醛(MDA)含量增大，其中，100和1003g／mL处理组活性氧自由基

2、(ROS)水平升高达到显著程度；随着处理时间延长，根尖细胞的超氧化物歧化酶(SOD)活性和过氧化物酶(POD)活性在1和1Og／mL处理组持续升高，而在100和1000g／mL处理组则呈先升高后降低的趋势．过氧化氢酶(CAT)活性变化规律表现出持续升高的态势，在处理24I1后达到最大．电泳分析结果显示处理未造成大豆根尖细胞产生DNA片段．土荆芥组培根分泌物未导致大豆根尖细胞凋亡．关键词：土荆芥；组培根分泌物；化感作用；根尖细胞；氧化损伤中图分类号：()945．79文献标志码：A文章编号：1001—8395(2013)03～0440一O5

3、doi：10．3969／j．issn．1001—8395．2013．03．028不同逆境因素在作用于细胞时都具有一个共同控制其蔓延提供理论依据的和主要的特征，即产生活性氧自由基(ROS)．细l材料与方法胞内ROS的代谢受到精确调控，微小的环境波动都可能引起ROS代谢失衡J，使细胞内ROS累积，扰1．1供试材料供体植物土荆芥采自成都市净居乱细胞抗氧化系统，引起生物膜过氧化损伤，最终导寺附近荒地，受体植物大豆种子购自成都双桥子家致细胞死亡．某些植物的化感作用能影响周围植物乐福超市．活性氧的代谢过程，导致植物细胞生物膜过氧化、抗1．2根系分泌

4、物的收集、材料的培养及处理根氧化系统紊乱J，H．P．Bais等证明斑点矢车菊系分泌物的收集、材料的培养及处理方法见文献(Centaureamaculosa)通过释放(一)一儿茶素(Cate[14]．分别用1、10、100和1000tzg／mL的根系分chin)，使受体植物产生大量的ROs，影n向钙离子信号泌物处理大豆根尖，以Hoagland营养液为对照调控，最终导致了植物细胞的快速死亡．本研究室发(cK)，每处理3次重复，置于(25±1)qC培养室暗现，入侵植物土荆芥(Chenopodiumambrosioides)地上培养，分别处理6

5、、12和24h．处理结束后，剪取5部分挥发油对蚕豆根细胞抗氧化系统具有较强的化mm根尖备用．感作用J，并影响根尖细胞的有丝分裂过程，导致染1．3活性氧和丙二醛(MDA)含量的测定以上色体畸变率升高，并诱导了植物根细胞程序性死述根尖为材料，采用羟胺氧化法测定0一产生速亡j．植物根系可以向外释放化感物质，扰乱根际微率；采用硫酸钛法测定H0含量；采用硫代环境的原有秩序Ⅲ。引．四川省是全国的大豆(Glycine巴比妥酸比色法测定MDA含量”．n)作物主产省，土荆芥是该省大豆田中常见的人1．4抗氧化酶活-眭的测定称取0．4g根尖，液氮侵杂草，目前

6、有关土荆芥根系分泌物对大豆影响的研磨成粉末转人5mLEP管中，加入4mL预冷的研究尚未见报道．本研究分析了土荆芥组培根分泌含0．05moL／L的磷酸缓冲液(pH=7．0)，4℃下，物对大豆根尖细胞活性氧代i身}和抗氧化系统的影10000r／min离心40rain，上清液为酶粗提取响，旨在探讨土荆芥通过根系分泌途径对周围植物液．参照文献[15]的方法，采用愈创木酚法测定的化感作用机制，为深入研究土荆芥的人侵机制和过氧化物酶(POD)活性，氮蓝四唑法测定超氧化物收稿日期：2011—08—30基金项目：川省应用綦础研究金(2009JY0065

7、)和四川省教育厅自然科学重点基金(11ZA097)资助项目通信作者简介：炜(1963一)，女，教授，主要从事生态学的研究6第3期何兵，等：土荆芥组培根分泌物对大豆根尖细胞的氧化损伤歧化酶(SOD)活性，紫外吸收法测定过氧化氢酶荆芥组培根分泌物引起大豆根尖细胞0一的产生(CAT)活性．速率提高，且具有时间和浓度双重效应，如图1所1．5根尖DNA的提取与分析采用十六烷基三示．在不同处理时间段内，大豆根尖细胞0一的产甲基溴化铵法¨提取大豆根尖细胞DNA．采用生速率均随着分泌物浓度升高而增加，其中，1g／DNAMarkerII作参照，质量分数2

8、％琼脂糖凝胶电mL处理组和10b~g／mL处理组O一的产生速率升泳(0．5×TBE)，电压6V／cm，电泳时间2h，EB染高不明显；且随着处理时间的延长，0一的产生速色，凝胶成相系统照相．率的升高程度还有所