山豆根水提物对白血病CEM细胞生长抑制及其机制研究-论文.pdf

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1、LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2012VOL．23NO．8时珍国医国药2012年第23卷第8期山豆根水提物对白血病CEM细胞生长抑制及其机制研究朱大诚，周军，何莲花，朱金华，赵志冬，欧阳永伟(江西中医学院，江西南昌330004)摘要：目的研究山豆根水提物对白血病CEM细胞的生长抑制及其可能机制。方法以人类T淋巴细胞白血病CEM细胞作为研究对象，采用MTT实验检测山豆根对CEM细胞的抑制率；光镜、电镜技术观察CEM细胞形态结构的改变；琼脂糖凝胶电泳检测山豆根水提取物对CEM细胞的诱导凋亡作用。结果山豆根水提物

2、能明显抑制CEM细胞的生长，药物浓度在0．019Ing／ml作用48h后，即具有显著的抑制作用，抑制率呈剂量和时间依赖性，半数抑制浓度(Ic)约为9．728nlg／ml；光镜、电镜下见细胞体积缩小，细胞膜皱缩，染色质明显浓缩、聚集，边聚于核膜下呈典型的凋亡特征；琼脂糖凝胶电泳结果显示实验组出现明显的DNA梯形凋亡带，而对照组没有出现梯形条带。结论山豆根水提物对白血病CEM细胞的生长具有明显的抑制作用，抑制白血病CEM细胞生长的机制之一是诱导CEM细胞凋亡。关键词：山豆根；白血病；CEM细胞；凝胶电泳；细胞凋亡D0I标识：doi：10．3969／i．issn．

3、1008-0805．2012．O8．037中图分类号：R285．5文献标识码：B文章编号：1008．0805(2012)08—1931-02山豆根又名广豆根、柔枝槐、山大豆根、黄结、苦豆根等，为豆r／min×8min，台盼蓝拒染法进行细胞计数，用含体积分数10％科蔓生性矮小灌木植物越南槐SophoratonkinensisGapnep．的干燥新生牛血清的RPMI一1640培养液调至细胞浓度至3×10／ml，根及其根茎，主产于广西、贵州等地；多为野生，其药性苦寒，有按每孔190l接种于96孔培养板，共分为6个山豆根水提物不毒。本药功效始载于《开宝本草》：“主解

4、诸药毒、止痛、消疱肿同浓度组、空白组和对照组。山豆根水提物配成6个浓度，每组毒”；《本草经疏》谓山豆根为解毒清热之上药。目前诸多实验研设6个复孔，其中一个孔做细胞涂片用；另设空白组(只加培养究表明，山豆根水提物及其所含的多种生物碱对体内外多种实体液，不加CEM细胞)和对照组(培养液中只加CEM细胞，不加药瘤均有不同程度的抑制作用；临床用于白血病治疗的中药复物)。接种培养24h后，实验组分别人6种不同浓度的STAE溶方及单味药多具有清热解毒、扶正补虚和活血化瘀的功效。基于液(终浓度分别为0．019，0．076，0．304，1．216，4．864，19．456m

5、g／此，山豆根是否具有抗白血病作用，未见有文献报道。本研究探m1)10l，微震荡，分别培养(24，48，72h)三个时间段后，每孔加讨不同浓度山豆根水提物抗白血病CEM细胞的作用。现将实验入M1Tr(5mm1)20l，继续培养4h后，离心1500r／min×10结果报告如下。min，吸弃上清液，每孔加入二甲基亚枫(DMSO)150Ixl，避光震荡1材料10rain，使甲躜充分溶解，置于自动酶标仪上，测定492nm处的吸白血病CEM细胞株购于天津市中国医学科学院血液学研究光度(A)值。抑制率的计算公式如下：所，本研究室液氮长期保存。山豆根购于南昌采森大药房(产

6、地抑制率(％)=[(对照组A值一实验组A值)／对照组A值]广西，批号0810013)，M_rr(噻唑蓝)购于美国Amresco公司，RP—×100％MI1640培养基购于美国Gibco公司，DNALadder检测试剂盒购2．4形态学观察于凯基生物科技发展有限公司，其余试剂购于天津永大化学试剂2．4．1光镜将上述MTT比色试验中的实验组和对照组CEM开发中心。细胞生长的一般情况在倒置显微镜下观察并照相；而后对各组2方法CEM细胞悬液离心涂片，Giemsa染色，油镜下观察细胞形态的变2．1山豆根水提物(SophoraeTonkinensisAqueousExtr

7、act，化。STAE)制备精确称取山豆根50g置于烧杯中，加入20倍量的双2．4．2电镜取对照组CEM细胞、山豆根水提取物3个浓度蒸水，即1000ml，用三层纱布封闭烧杯口，文火加热，直至沸腾(0．304，1．216，4．864mg／m1)作用于CEM细胞，两个时间段(24，开始计时，保持lh，煎取3次，合并3次的粗提液，用中速定性滤48h)后，分别制成超薄切片，在透视电镜下观察细胞超微结构的纸、循环水式多用真空泵进行抽滤，滤除粗提液中的杂质颗粒，然变化。后用旋转蒸发仪对抽滤液进行浓缩，制成山豆根水提物浓缩液，2．5DNA琼脂糖凝胶电泳取对数生长期的CEM细

8、胞制成细冷藏备用。用时精确量取，用双蒸水稀释，配成山