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时间:2020-04-16
《酪酸梭状芽孢杆菌低成本培养基的优化-论文.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第42卷第1期工业微生物Vo【_42No.12012年02月IndustrialMicrobiologyFleb.2012doi:10。3969[j.issn.1001—6678.2012.01.002酪酸梭状芽孢杆菌低成本培养基的优化戚薇,李安东,尹娅凤,肖瑞峰,宗志友,王海宽(工业微生物教育部重点实验室,天津科技大学生物工程学院,天津300457)摘要:本文重点在于提高酪酸梭状芽孢杆菌活茵数量,降低发酵培养基成本。通过对发酵培养基中不同碳源、氮源、生长因子等进行单因素研究,得到最佳培养基组成:可溶性淀粉10g/L,豆粕(中性蛋白酶水解
2、3h)20g/L,玉米浆3g/L。用此培养基在37℃培养24h,采用高层半固体琼脂试管法对酪酸梭状芽孢杆茵进行活茵计数,活茵数可达8.2x10d./mL。培养基中添加K2HPO45g/L、MgSO4·7H2O0.2g/L、MnSO4·H2O0.2g/L培养32h时,酪酸梭状芽孢杆菌芽孢转化率可达95%。关键词:酪酸梭状芽孢杆茵;可溶性淀粉;豆粕;培养基优化酪酸梭状芽孢杆菌(Clostridiumbutyricum),溶性淀粉作为碳源,中性蛋白酶水解豆粕提供其所是一种革兰氏阳性厌氧内生芽孢杆菌n],又名丁酸需氮源,又使用玉米浆提供其所需生长
3、因子,较大程梭状芽孢杆菌或宫入菌。存在于酸奶、奶酪、人或动度降低了生产成本。对发酵培养基各组分进行优物的粪便、某些土壤中,在部分人群中也能分离到。化,获得有效简易的发酵培养基,为规模化生产提供日本千叶医科大学宫入近治于1933年首先发现并了理论指导。报告,作为微生态制剂来研究,故又名宫入菌。但其1材料及方法药理机制目前还没有比较确切的解释。现在酪酸梭状芽孢杆菌已被大量地研制成饲料添加剂和兽药1.1菌种来源等]。其活菌制剂已应用于消化、外科、小儿、肿瘤酪酸梭状芽孢杆菌(Clostridiumbutyricum)菌等原因造成的肠道菌群失调,急
4、慢性腹泻[3],抗生素株,天津科技大学酶与应用微生物研究室保藏。相关性肠炎、腹泻或便秘等疾病的治疗]。酪酸梭1.2培养基状芽孢杆菌专性厌氧],作为微生态制剂可促进肠种子培养基:葡萄糖8g/L,胰蛋白胨10g/L,酵道内有益菌群的生长繁殖【6],减少胺类物质的产生,母膏4g/L。抑制肠道内有害菌、腐败菌的增值[7],纠正肠道菌群发酵培养基:葡萄糖8L,胰蛋白胨10g/L,酵失调,减少肠道疾病的产生,起到防病的作用l8]。能母膏4g/L,K2HPO,5L,MgSO4·7H2O0.2g/L,在肠道产生维生素B族、维生素K、蛋白酶、淀粉酶MnSO
5、4·H2O0.2g/L,pH7.2。和氨基酸等若干种酶类和营养物质,这些酶类能促高层半固体琼脂培养基:液体发酵培养基添加进动物对营养物质的吸收和利用,提高动物的生产性能。其代谢物丁酸是肠上皮组织细胞再生、修复0.3%的琼脂。主要的营养物质。对多种抗生素有耐受性,与抗生上述培养基均在121℃灭菌20min。素同用时不会影响其生物作用【9]。酪酸梭状芽孢杆1.3培养方法菌克服了使用抗生素作为饲料添加剂所带来的副作1.3.1种子培养用。作为饲料添加剂时,因其内生芽孢,可避免各种液体试管深层静置培养,37℃厌氧培养16h。物理化学因素影响而失去活
6、性的问题。因此发展前1.3.2发酵培养景可观,社会效益和生态效益显著。本实验使用可5%的接种量加人发酵培养基于100mL平底基金项目:天津市农业科技成果转化与推广项目(0802030)。作者简介:戚薇(1963~),女(汉),天津,教授,博导,022—60601958。通讯作者:王海宽(1974~),男(汉),内蒙古,副教授,博士。——々——第1期工业微生物第42卷一guR0_【×)\粗烬烧瓶中,37℃厌氧培养32h。用量为8g/U,匡群n¨等研究得到葡6萄糖的5用量4为1302l1.3.3豆粕等水解液的制备g/t,。陈秋红[1]等研究发
7、现使用玉米淀粉也达到了中性蛋白酶酶活是20万Fig,确保植物蛋白水较理想的效果。可溶性淀粉作为碳源时,降低了生产溶液里含中性蛋白酶20U/mL,酶解温度控制在45成本,故选择可溶性淀粉作为碳源。℃,pH7.5。2.2不同氮源水解时间对活菌数量的影响1.4检测方法考虑到传统有机氮源:牛肉膏、酵母膏、各类蛋1.4.1活茵数量的测定白胨等物质,虽然其含氮量高,微生物较容易吸收利高层半固体琼脂试管计数法[1。。,用移液管取1用,但其价格均较高,不利于规模化生产。本实验采mL菌液加到9mL半固体琼脂试管培养基之中,振用四种廉价氮源:豆粕、花生饼粉、
8、黄豆饼粉、棉籽饼荡搅匀,不能有气泡,依次进行10倍梯度稀释,稀释粉,用中性蛋白酶水解。依据基础培养基,在其他条管和计数管于同一管,每个稀释度作3个平行,37件固定不变的情况下,分别添加20g/
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