进境大豆杂质中豌豆褐斑病菌的检疫鉴定-论文.pdf

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1、2012年第6期植物检疫PLANTQUARANTINE进境大豆杂质中豌豆褐斑病菌的检疫鉴定吴翠萍李彬张勇粟寒杨万风安榆林(1．江苏出入境检验检疫局江苏南京210001；2．南京出入境检验检疫局；3．连云港出入境检验检疫局)IdentificationofAscochytapisifromimportedimpuritiesofsoybeans．WuCuiping，LiBin，ZhangYong，SuHan，YangWanfeng，AnYulin。(1．JiangsuEntry—ExitInspectionandQuarantineBureau，Nanjing，210001，China；2．N

2、anjingEntry—ExitInspectionandQuarantineBureau；3．LianyungangEntry—ExitInspectionandQuarantineBureau)AbstractIsolateA1whichissimilartopathogenAscochytapisicausingpeabrownspotwasisolatedandculturedfromthesurfaceofpeasampleswithbrownspots．Thesampleswereselectedfromimpuritiesofabatchofsoy-beansimposedfr

3、omUSA．Basedontheresultsofcolonymorphology，culturalcharacteristicsonOA、MAandPDAmediums，microscopiccharacteristicsofthepycnidiaandconidia，ITSsequenceanalysisandpathogenicitytest，thepathogenwasidentifiedasA．pisi．Keywordsimposedsoybeans；pea；impurity；Ascochytapisi；identification摘要对一批进口的美国大豆杂质中挑选出的表面有褐色病

4、斑的豌豆样品进行病原菌分离，得到了一株与豌豆褐斑病菌(Ascochytapisi)相似的分离物A1。该分离物的菌落形态，在OA、MA、PDA上的培养特性，分生孢子器以及分生孢子等的显微形态特征，ITS序列分析以及致病性测定，结果表明应将该分离物鉴定为豌豆褐斑病菌(A．pisi)。关键词进境大豆；杂质；豌豆；豌豆褐斑病菌；鉴定中图分类号$41—30近几年来，我国大豆的进口处于快速增长期，1材料与方法2010年为4000多万吨，2011年已突破5000万吨1．1样品中病原菌的分离与纯化大关，预计2012年将升至6000多万吨。伴随着大挑选豌豆表面有褐色病斑的样品，先以流水将豆进口的同时，大量杂质

5、也随之进境。按照进境大表面冲洗干净，并用自来水浸泡4h使豌豆的表皮豆中允许杂质含量为2％的水平进行计算，每年我与胚分开。切取表皮上的病斑部分并分成约2mm国进口的大豆杂质约为100万t。然而，对大豆杂×2mm大小的组织块，放入1％的次氯酸钠溶液消质携带病原菌的风险尚未被关注。因此，有必要全毒1～2rain，用无菌水漂洗3次，以吸水纸吸去病部面地对大豆杂质中携带病原菌进行系统的疫情调表面的水，置于加有抗生素的PDA上(青霉素和硫查，以进一步评估进境大豆杂质的风险，从而为我酸链霉素的添加量均为100p,g／mL)，每皿放置6—国口岸对进境大豆实施针对性的有效监管措施提8块，于24℃黑暗培养，48

6、h后开始观察菌落长出供依据。的情况，对长出的菌落及时移取其边缘部分置于进境大豆中的杂质一般以豆荚、豆秆、玉米为PDA上，24℃黑暗培养条件下纯化培养。主，另外可能夹带一些小麦、大麦，也能零星地发现1．2病原菌形态鉴定其他豆类种子、水稻、高梁等。2011年11月，检疫观察组织块周围长出的菌落以及在24℃黑暗人员从～批来自美国大豆的杂质中发现了数量较条件纯培养10d后菌株的菌落整体形态、菌丝与子多的黄豌豆，其中部分豌豆的外表皮局部表现为褐实体产生情况，并在立体解剖镜和生物显微镜下分色。为此，本文对引起豌豆褐色病变(图1一A)的别观察和记载这些特征。同时将在PDA纯培养5病原菌进行了分离和鉴定。d

7、的菌株切取5mm×5mm大小菌丝块分别置于基金项目：国家质量监督检验检疫总局科研项目(20121K278)；“十二五”国家科技支撑计划课题(2012BAK11B02)收稿日期：2012～07—25，2012—10—10修回一27—2012年第6期植物检疫PLANTQUARANTINE5个菌株有4个特异性碱基差异。另外，据报道，病[1]TooleyPW，BunyardBA，CarrasMM，eta1．Devel