现代生化实验技术(试卷).doc

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1、现代生化实验技术试卷（食品学院农产品加工与贮藏工程09级研究生用）姓名何家林学号0202009292成绩1•分离纯化生物大分子的方法有哪些？（10分）答：制备生物大分子的分离纯化方法多种多样，主要是利用它们之问特异性的差异，如分子的大小、形状、酸碱性、溶解性、溶解度、极性、电荷和与其他分子的亲和性等,如盐析、有机溶剂沉淀、层利「、结品、电泳、离心、超滤等。2.蛋白质分离纯化技术屮哪些与它的等电点有关？试述这些技术分离提纯蛋白质的原理。（15分）答：蛋白质的盐析，等电点沉淀法和等电聚焦电泳。蛋白质

2、的盐析：将大量盐加到蛋白质溶液屮，高浓度的盐离子有很强的水化力，可夺取蛋白质分子的水化层，使Z“失水”，于是蛋白质胶粒凝结并沉淀析出。盐析时若溶液pH在蛋白质等电点则效果更好，由于各种蛋白质分子颗粒大小、亲水稈度不同，故盐析所需的盐浓度也不一样，因此调节混合蛋白质溶液中的屮性盐浓度可使各种蛋白质分段沉淀。等电点沉淀法：蛋白质在静电状态时颗粒Z间的静电斥力最小，因而溶解度也最小，备种蛋H质的等电点有旁别，可利用调节溶液的pH达到某一蛋白质的等电点使Z沉淀。等电聚焦电泳：利用一•种两性电解质作为载体

3、，电泳时两性电解质形成一个由正极到负极逐渐增加的pH梯度，当带一定电荷的蛋H质在其中泳动时，到达各自等电点的pH位置就停止，此法可用于分析和制备备种蛋白质。3•—种相对分子质量为28000、PI为5.5的酶被一种相对分子质量类似、但PI为7.0的蛋白质和另外一种相对分子质量为120000、PI为5.4的蛋白质污染。试提出一种纯化该酶的方案。（15分）答:4•一个蛋白质混合物含有下面几种不同的组分:AMt=12000PI=10.0;BMt=62000PI=4.0;CMt=28000PI=7.0;D

4、Mt=9000PI=5.0o不考虑其他因索，分别指出在下述情况下被洗脱的顺序。（1）该混合物用DEAE-纤维素柱层析时，以逐渐提高洗脱液的盐浓度方式进行洗脱。（2）该混合物用SephadexG-50凝胶进彳亍柱层析。（15分）5•—套标准相对分了质量蛋白在适肖条件下用葡聚糖凝胶颗粒柱层析确定它们的洗脱体积，获得如下表的数据:蛋白质和对分子质量洗脱体积/mL人Y■球蛋白15800057—未知相对分子质量的蛋人转铁蛋白8800067白质在相同条件下洗脱体积为牛血清蛋白670007080mL,试计算出

5、该蛋白质的相对分子质量。（15分）卵白蛋白4500074胰凝乳蛋白酶原2500085马肌红蛋白1690088牛心细胞色素c13400916•什么是反相液相色谱法？什么是正相液相色谱法？列出高效液相色谱法常用的儿种检测器并说明它们适用的分析对象及适用范弗I。（15分）答：反相液相色谱法是指选用非极性物质为固泄相，而极性溶剂为流动相的液液色谱。正相液相色谱法是指以极性物质作为固定相，非极性溶剂作流动相的液液色谱。示差折光检测器适用的分析对象是对温度敏感，要求检测器的温度控制精度为10・3°C。适用范

6、围不宜用于梯度洗脱，因为溶剂组成的变化会使折射率产生很大的改变。紫外光度检测器适用的分析对象是对特定波长紫外光有选择性的吸收，且组分浓度与吸光度的关系服从比耳定律。适用范围面广。荧光检测器适用的分析对彖是对流速和温度变化不敏感物质，适用范围可用于梯度洗脱。7.试结合口己在研一阶段所进行的实验研究写一•些实验屮的心得体会。（15分）答：H前我还没有进入实验室，所在在这方面就没办法回答，我现在主要的任务是阅读文献，个人认为文献是试验进行的前提和基础，有了坚实的理论基础，实验进行就会变得顺手的多！我在

7、查找文献时主要是通过学校图书馆链接的屮国知网和把主题发给外校同学也在他们的学习数据库收集文献。