寒地水稻优质RNA提取技术优化-论文.pdf

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1、黑龙江农业科学2015(7)：9～1IHeilongjiangAgriculturalSciences寒地水稻优质RNA提取技术优化刘华明，董志博，隋晓凯，王春雷，王阳，周运泽，孙晓丹(黑龙江大学生命科学学院，黑龙江哈尔滨15000)摘要：空育131和稻花香是黑龙江省很有代表性的寒地栽培品种，也是育种研究的重要材料。为了获取此品种的优质RNA，以经低温避光处理3d的空育131及稻花香水稻的10日龄水稻苗叶为材料，利用优化的UNIQ-10柱式TotalRNAExtractor(Trizo1)试剂盒法提取RNA。之后，进行RT—PCR反应，并对RT—PCR的结果进行琼脂

2、糖凝胶电泳的检测。结果表明：通过优化，改进了UNIQ-10柱式TotalRNAExtractor(Trizo1)试剂盒法，提取的RNA纯度较高，A。／A。。均接近1．8，并且RT—PCR的条带清晰。关键词：水稻；RNA；Trizol；RT-PCR中图分类号：$511文献标识码：A文章编号：1002—2767(2015)07—0009—03IX)I：10．11942／j．issnl002—2767．2015．07．0009水稻(0ryzasativa，2n一24)禾本科、稻属的质空间结构消失，蛋白质迅速与核酸解离，细胞结典型代表作物，原产于温热带地区。水稻作为世构降解

3、，释放出RNA[5；③异硫氰酸胍一酚一氯仿界上最重要的粮食作物之一，在全球的粮食生产法，这种方法包括用含异硫氰酸胍和酚的一种单和消费中具有举足轻重的地位，在黑龙江省更是相液来裂解细胞。加入氯仿产生第二相(有机农民增收的主要作物。相)，DNA和蛋白质在有机相中被抽提，酸性苯酚近年来，随着生物技术的不断进步和发展，基可促使RNA进入水相，离心后可形成水相层和因的克隆和表达已成为常规分子生物学研究手有机层，这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质段。水稻基因工程研究需要从水稻材料中提取高和DNA分离开；④CTAB法L6]，CTAB是一种阳纯度的RNA。RNA分离纯化是基因表达分

4、析的离子去污剂，在低离子强度溶液中CTAB可以将前提，纯化后的RNA可应用于cDNA合成、反转核酸与酸性多聚糖沉淀出来，而蛋白质和中性多录PCR(RT—PCR)、定量RT-PCR等。与RNA聚糖仍留在溶液里。在离子强度较高的溶液中，相关的技术还有SELEX技术、RNA干扰技术、CTAB会与蛋白质、大多数酸性多聚糖以外的多引诱物技术、核酶技术[1等。因此，如何分离到聚糖形成复合物，不能沉淀出来核酸。然后用有高纯化的RNA，对于后续试验至关重要。但由于机溶剂酚和氯仿抽提去除酚类、蛋白质、多糖等杂RNA很容易被RNase降解，而且RNase广泛存质，异丙醇／无水乙醇等沉淀

5、即可使核酸分离在不易变性失活，因此，高质量RNA的分离已经出来。成为关键的分子生物学技术之一。目前水稻本研究主要用采用改进的UNIQ_1O柱式RNA提取方法主要有：①试剂盒法，采用的Tr-Torzol总RNA提取试剂盒对水稻叶RNA进行izol具有超强的裂解能力和抽提灵敏度，结合试提取，并对试验方法进行了优化。剂盒采用特殊的吸附膜，大大增强了RNA的得1材料与方法率。得到的RNA纯度好，完整性高。提取的1．1材料RNA没有DNA和蛋白污染，可用于Northern供试水稻品种空育131及稻花香，均由黑龙blot，Dotblot，polyA筛选，体外翻译，Rnase保江

6、大学生命科学学院寒地水稻分子研究室李荣田护『3；②异硫氰酸胍一超速离心法，异硫氢酸教授提供。试验所用仪器设备有UNIQ一10柱式胍(GITC)是一类解偶联剂，与细胞作用后，蛋白Torzol总RNA提取试剂盒(生工生物工程股份有限公司生产)、Eppendorf分光光度计(型号：收稿日期：2Ol5-03—02BioSpectrometer，Eppendorf)。基金项目：国家“863”资助项目(2014AA10A603)1．2方法第一作者简介：刘华明(1992一)，男，海南省海口市人，在读学士，从事细胞分子生物学研究。1．2．1试验前处理及设计配置0．1DEPC通讯作者

7、：孙晓丹(1974一)，女，黑龙江省哈尔滨市人，博士，水，将试验用的Tip头，离心管，PCR管放入讲师，从事细胞分子生物学研究。E-mail：sunxiaodan2013@outlook．com。DEPC水过夜浸泡，然后将其取出甩干分别放入9黑龙江农业科学2015(7)：12～18HeilongjiangAgriculturalSciences基于四段基因序列的野牡丹科植物PCR反应条件优化白岳峰，吴燕燕，李淑娴，陈燕琼，彭东辉(福建农林大学园林学院，福建福州350002)摘要：为了建立植物分子系统学研究中常用的核基因的ITS，CHS和叶绿体基因的psbA—tr