ApoB基础理论与临床应用价值.pdf

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1、1.ApoB的基础理论与临床应用价值载脂蛋白B(apolipoproteinB)是LDL颗粒中惟一的蛋白质成分。在正常血浆中存在两种apoB，即apoBl00和apoB48。apoBl00主要由肝脏合成，在VLDL的组装和分泌中起重要作用，它在血浆中的浓度为6O～120mg／dl。apoB48主要在小肠中合成，对乳糜微粒(CM)的组装和分泌是不可缺少的。因此，对膳食中脂肪的吸收apoB48起着非常重要的作用。一、载脂蛋白B的性质apoB的最主要物理化学特性是不溶解于水溶液，极易发生自身的聚合。在分离过程中apoB也容易被蛋白酶水解和氧化。在SD

2、S-PAGE电泳中测定apoBl00的分子量为549kD，apoB48的分子量为264kD。apoB中也含有碳水化合物，糖的含量约占4％～10％。apoB分子中有19个潜在的N一连接的糖基化位置，还有7个不同区域可与肝素紧密结合。这些结合区域除能促使富含三酰甘油的脂蛋白与毛细血管的内皮细胞结合之外，它们还能促使脂蛋白脂肪酶水解脂蛋白(VLDL和CM)核心中的三酰甘油，使之VLDL形成IDL和LDL。apoBl00和apoB48均有高度的免疫原性，用它们免疫家兔可形成多克隆抗体，这两种抗体之间具有交叉反应，表明这两种apoB含有共同的抗原决定族。

3、在apoB的分子结构中含有25个半胱氨酸，它们在分子中的分布很不均一，其中12个分布于前500个氨基酸残基中。这25个半胱氨酸中有16个是以二硫键的形式存在。apoB以两种形式存在，即apoBl00和apoB48。在人体内，apoB48产生于小肠，apoBl00产生于肝脏，小肠也可能产生一些apoBl00。apoB48是由B100的氨末端的一半所组成，含2152个氨基酸残基，不能与LDL受体的结合域结合。它是乳糜微粒和其残粒(remnant)的主要成分。apoBl00含4536个氨基酸残基，是VLDL和IDL和脂蛋白(a)[Lp(a)]的主要载

4、脂蛋白，是LDL的惟一载脂蛋白。apoBl00有两个区域相似于apoE，被用于与LDL受体相结合，其中从第3359到3367位氨基酸残基序列具有高度的保守性，带有很强的正电荷。这一区域既能调节VLDL与LDL受体的相互作用，也能调节LDL受体的表达。用apoBl00单克隆抗体研究的结果证实，apoB基因位点的突变大约使人群中10％～20％个体胆固醇水平受到明显影响。但也有家族分析资料表明，apoB基因位点不是影响血浆apoB水平的主要位点，像家族性混合型高脂蛋白血症(FCH)或由于LDL引起的血脂异常都与apoB基因位点没有关联。但是，如果含有

5、脂蛋白脂肪酶(LPL)、apoAI／apoCⅢ／apoA—IV基因簇和apoE基因位点的变异，那么它们对群体中大部分个体的apoB水平都具有一定的影响。apoBl00水平的升高是几种疾病的主要特征，如高apoB血症(hyper-apoB-emia)、FCH和致动脉粥样硬化脂蛋白表型。高apoB血症是早发性冠心病患者的一个共同的特征。在这些患者中apoB的水平相当于家族性高胆固醇血症(FH)患者血浆中的水平，但是LDL—c水平浓度则很低。对血脂正常的个体和对高脂蛋白血症病人的大量分析结果表明，在染色体中有一个特异的动脉粥样硬化敏感位点(ather

6、osclerosissuspectibilitylocus，ATSL)控制着LDL颗粒的大小。该位点在第19号染色体的短臂，接近LDL受体位点和胰岛素受体基因位点。虽然具有胰岛素抗性的个体都具有致动脉粥样硬化的脂蛋白表型(ALP)，但是并不能完全肯定这个ALP表型是由胰岛素受体基因变异造成的，还是因为另一个更接近于LDL受体的基因即ATSL位点的存在。二、载脂蛋白B的物理化学结构、性质及功能(一)apoB的物理化学结构脱脂后的apoB在水容液中容易聚集，不易溶解，对研究其结构带来不少困难，它既不溶于4．2mol／L的四甲基尿素(tetramet

7、hylurea)，也不溶于水溶液的缓冲液。当用有机溶剂脱脂，它在SDS中是以二聚体的形式存在。在分离过程中apoB易于被蛋白酶水解、氧化1或者机械地切变(shearing)。Goto等曾用不同的化合物来修饰apoB并研究其结构，发现不同化合物对apoB的构象有不同程度的影响，其影响程度是：羧丙酰基>重氮化>酰基化或氨基化。化学修饰也可能改变apoB的抗原性，但不影响其光学性质，还原甲基化apoB中的赖氨酸和精氨酸可使其丧失与LDL受体结合的能力，说明apoB中赖氨酸和精氨酸与LDL受体的结合密切相关。apoB的分子量过去在不同实验室得到的结果差

8、异很大，过去30年中研究者应用了不同的方法，包括X射线散射(scattering)、电子显微镜、溴化氰裂解、凝胶过滤、分析超速离心和SDS-凝胶电泳等