资源描述：
《生物脱硫催化剂的筛选.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、石油与天然气化工第36卷第3期CHEMICALENGINEERINGOFOIL&GAS213生物脱硫催化剂的筛选112沈齐英赵锁奇丁媛(1.中国石油大学(北京)2.北京石油化工学院)摘要为了有效脱除石油及其产品中的有机硫,本实验采用复杂有机硫化合物为限制性底物的驯化方式,从被原油污染土壤中驯化、筛选,分离得到对有机硫具有一定脱除效果的菌株,鉴定为枯草芽孢杆菌亚种(Bacillussubtilissubsp.subtilis);以该菌株和白腐真菌作为出发菌株,通过原生质体融合获得具有双出发菌株性状、遗传稳定、可产生孢子和具有一定脱硫能力的融合子。对成品油的脱硫实验可知:融合子可以直接
2、应用于油品的脱硫,有较高的脱硫率,且有较大范围的环境耐受能力,有一定的实际应用价值。关键词原生质体融合生物脱硫成品油石油及其产品中的硫几乎都是有机硫,燃烧时苯并噻吩、苯并噻吩、4,6-二甲基二苯并噻吩、苯硫排放出的有毒气体会造成严重的空气污染;广泛使醚(ACROS公司产品,纯度均为99%);正十六烷#用的加氢脱硫技术成本较高,而且难以脱除石油燃(德国HALTERMANN公司产品,纯度99%);0柴#料中的含硫杂环化合物;因此,迫切需要一种在较温油、93汽油(燕山石油化工公司炼油厂产品)。其和的条件下能进行脱硫的方法。余试剂均为国产分析纯。近年来,随着生物技术的发展以及石油炼制工无机
3、盐培养液:KH2PO40.5g、K2HPO40.5g、业的不断复杂化和尖端化,采用生物技术脱硫越来MgSO40.2g、CaCl20.1g、NaCl0.2g、MnSO4痕量、越为人们所关注,其中生物催化剂的脱硫性能、遗传FeCl2痕量、NH4NO31.0g,加水定容至1000mL;富集培养基、基本液体培养基、基本固体培养稳定性及环境耐受能力等是影响生物脱硫技术工业[1]基、完全液体培养基、完全固体培养基、高渗再生选化的主要因素之一。[2]择培养基、原生质体稳定液。鉴别培养基如下:1实验材料与方法鉴别1=基本固体培养基+200u/mL青霉素1.1实验材料(Penicillin,Pc);
4、1.1.1实验主要仪器鉴别2=基本固体培养基+200u/mL制霉菌CL3010高效毛细管电泳液相色谱一体机(北京素(Nystatin,Nt);彩陆科学仪器有限公司)、LGR10-4.2型冷冻离心鉴别3=基本固体培养基+200u/mL青霉素+机(北京医用离心机厂)、SH-3600A电热恒温培200u/mL制霉菌素(Pc+Nt)。养箱(天津市泰斯特仪器有限公司)、不锈钢手提式1.2实验方法灭菌器(上海申安医疗机械厂)、HZQ-C恒温空气1.2.1脱硫微生物的驯化浴振荡器(哈尔滨市东明医疗仪器厂)。5g菌源土壤充分溶于100mL生理盐水中,从1.1.2实验主要试剂中取出10mL菌悬液接种
5、于80mL无机盐培养液溶菌酶、蜗牛酶(中科院上海生化所产品);青中,无机盐培养液中加入原油溶解限制性底物10霉素、制霉菌素(美国Amresco公司产品,分析纯);mL(苯并噻吩0.1mmol/L、二苯并噻吩0.1mmol/聚乙二醇(6000)(上海化学试剂二厂,分析纯);二L、4,6-二甲基二苯并噻吩0.1mmol/L和苯硫醚214生物脱硫催化剂的筛选20070.1mmol/L),120r/min,28℃,振荡培养24h(1个凡是在再生选择培养基平板上丝状生长的菌[6,7]周期);取振荡培养后菌悬液10mL加入上述相同落,将其接种到斜面培养基上冰箱保存。90mL新鲜无机盐培养液中,
6、120r/min,28℃,振荡1.2.6出发菌株和融合后丝状生长的菌株抗生素培养48h;如此重复10个周期(240h)。抗性实验及其形态学比较1.2.2菌种的琼脂平板分离和保存活化出发菌株和融合后丝状生长的菌株后,以驯化10个周期结束后,以无菌操作琼脂平板画鉴别培养基制成倾注平板后,置于32℃培养箱内培线分离后,置于30℃恒温培养箱内培养,待琼脂平养观察,在鉴别1、鉴别2和鉴别3培养基内均呈丝板长出孤立菌落后接种于斜面,4℃冰箱保存备用。状生长菌落可以认为是融合子,将其接种到斜面培[8]1.2.3脱硫微生物的确定(菌种的脱硫实验)养基上冰箱保存备用。菌种的活化富集培养:以无菌操作将
7、冰箱保存1.2.7融合子的筛选的菌株接种于100mL活化富集培养基中,28℃、120融合子的活化富集培养:以无菌操作将冰箱保r/min好氧振荡培养24h后,制备0.5g/mL(0.5g存的融合子接种于100mL活化富集培养基中,湿菌体悬于1mL无机盐培养液中)菌悬液备用。28℃、120r/min好氧振荡培养24h后,20℃、6000分别取浓度0.5g/mL菌悬液100mL,配制成r/min离心分离收集菌体。将菌体分别接种于含有含10%正十六烷溶解二苯并噻吩(DBT)2
