蛋白检测专家 您在为研究蛋白质之间相互作用苦恼吗 您.pdf

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1、蛋白检测专家您在为研究蛋白质之间相互作用苦恼吗？您的文章苦于没有好的图片结果吗？您希望在信号转导方向上走的更远吗？®DuolinkDuolink专注研究蛋白相互作用蛋白检测专家颠覆了传统的蛋白相互作用的研究方法———Duolink®蛋白研究技术Olink生物科学来自于瑞典，目前已成为蛋白研究和诊断技术的全球领先者。Duolink®扩展了传统的免疫功能和免疫组化研究，使用现有的抗体，通过荧光显微镜或明视野显微镜对蛋白质进行研究。这项技术适用于蛋白质、蛋白质之间相互作用以及蛋白质修饰研究，是信号传导研究的良好工具，适合于微量复杂的生物样品的实验。邻位连接技术和滚环扩增

2、技术的完美结合信号定位用于未修饰定量的细胞和组织DNA放大可视您知道PLA（proximityligationassay）技术吗？邻位连接技术是近几年建立的一种可以用于研究蛋白质的定量、定位、相互作用、修饰以及功能的新DNA连接技术。该技术通过一对邻位探针将特异性蛋白质检测转换为DNA序列分析，可以直接分析复杂的生物样品，检测灵敏度和精确度高。蛋白检测专家PLA技术检测蛋白质的核心是一对邻位探针。该对探针将单链DNA与一对蛋白识别因子相连接，使其可以通过免疫吸附或其他方法同步结合到一个待测蛋白分子上。PLA反应分为3步：图1：一抗，目标蛋白和PLA探针共孵育，一抗

3、与目标蛋白相结合，随后带寡核苷酸PLA探针与抗体相连接。图2：加入连接酶溶液，其中含有两条寡核苷酸链和连接酶，杂交的寡核苷酸环化图3：加入含有核苷酸和聚合酶的扩增溶液。其中的一条PLA探针作为引物，以环化的产物作为模板向外进行扩增，随后加入检测溶液，包括荧光素标记的寡核苷酸，它能跟环化的产物杂交。通过荧光显微镜或明视野显微镜观察。您知道滚环扩增技术（Rollingcircleamplification）技术吗？RCA既可进行靶核酸扩增，也可进行信号放大扩增。有线性与指数两种形式的RCA。线性RCA是引物结合到环状DNA上后，在DNA聚合酶作用下被延伸。产物是具有大

4、量重复序列（与环状DNA完全互补）的线状单链。线性RCA用于靶核酸扩增仅限于一些具有环状核酸的病毒、质粒和环状染色体。Schwetizetr等人建立了免疫RCA，引物的5´端标记有抗体，抗原抗体反应后，加入RCA反应组分与环状DNA模板进行RCA，然后标记有荧光素的探针与RCA产物原位杂交，最后对荧光信号进行检测，该方法的灵敏度可达0.1pg/ml。蛋白检测专家蛋白相互作用的研究——可视化，量化。Duolink检测每一个蛋白和它的相互作用。总会有一款试剂盒符合您的需求。颠覆传统方法免疫共沉淀/Westernblot蛋白检测专家Duolink是co-IP和co-lo

5、calization完美结合常用研究方法的对比鉴别定位内源性蛋蛋白之间的组织机未修饰的单一分析白质相互作用构分析细胞蛋白FRETBRETBiFCCo-immunoprecipitationCo-localizationPLA细胞经过生长因子的刺激后，定量研究PDGF和VEGF受体的相互作用红色：PDGF/VEGF受体相互作用蓝色：Hoechst染核绿色：Alexa488-鬼比环肽染细胞质（细胞骨架）蛋白检测专家特异性的结合靶蛋白，精确定量•输入来源于显微镜里的原始数据。显微镜厂商Olympus,Leica,NikonandZeiss•自动的检测胞核和胞质y•对细胞

6、群体中单个细胞逐一分析•精确的定位您感兴趣的区域•可以灵活方便的输出excel表格蛋白检测专家高敏感度检出siRNA检出效果：AB表明在小鼠胚胎成纤维细胞中RNAi沉默SMAD4基因表达。A图表明使用RNAi干扰的小鼠细胞。B图表明未处理的细胞，蓝色表示用Hoechst33342染核，红色表示PLA信号单个细胞检出经过处理的细胞PLA信号减弱，达到一个细胞仅仅只有0-10PLA信号使用westernblot检出A表示未处理的细胞SMAD4基因的表达，B表示处理过后SMAD4的表达SiRNA研究Duolink的优势：方法精确定量蛋白水平定位单一细胞微量样品Real-

7、timePCR○××××Westernblotting○○×××免疫染色×○○○○Duolink○○○○○蛋白检测专家亚细胞的原位检测•准确定位•还原细胞最真实的状态无需细胞裂解无需过表达不受传统Tag标签的限制•仅仅需要少量细胞蛋白检测专家客户反馈“…wewereabletoconfirmdatafroma2-hybridscreenandfromco-immunoprecipitationexperimentsthatdemonstratedadynamicinteractionbetweenamembranereceptorandatranscription

8、facto