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1、32杜仲叶有效成分提取工艺的研究杜仲叶有效成分提取工艺的研究钱骅赵伯涛张卫明摘要用纸层析———紫外分光光度法测定绿原酸含量,用正交试验处理数据。结果表明:杜仲叶采用70%乙醇、pH2.5于90℃下以1:12、1:10、1:8的料液比浸提3次,每次0.5h,绿原酸的浸出量最高。关键词杜仲叶;绿原酸;浸提杜仲(Eucommiaulmoides)是我国特有经济树种。杜仲皮是传统中药,具有补肝肾、强筋骨、[1]安胎、益寿和降血压的作用。现代研究表明,杜仲叶和杜仲皮具有基本相似的化学成分和药[2]理作用,可以杜仲叶代替杜仲皮入药和做保健品。同时还发现杜仲叶
2、提取物可作用人体骨骼和肌肉中蛋白质胶原的合成和分解,具有促进代谢,预防骨质疏松的功能。用杜仲叶制成的[3]这种保健品已成为美国宇航员进入太空的必备食品。研究发现杜仲叶含有较高的绿原[4]酸,为主要药效成分之一,具有利胆、降压、升白、抗菌作用。同时绿原酸具有抗氧化活性,是有前途的食品抗氧化剂。我国有十分丰富的杜仲资源,为开发利用这一宝贵资源,我们以绿原酸提取率为指标研究了不同条件下对杜仲叶有效成分提取的影响。现将结果整理如下。1材料及仪器材料:于97年10月采自南京野生植物综合利用研究所院内生长期为10年的杜仲林。试剂:绿原酸标准品由中国药品生物制
3、品检定所提供,各种试剂为分析纯。仪器:岛津UV-250紫外、可见分光光度计、三用紫外分析仪。2方法与结果2.1绿原酸的测定2.1.1最大吸收峰的确定精密称取绿原酸标准品0.2mg,用50%甲醇液溶解,定容于10ml的容量瓶中,摇匀,吸取上述标准溶液1ml,用50%甲醇液稀释至10ml(此为母液),吸收母液各1ml,再用50%甲醇稀释至10ml,并以50%甲醇为空白,采用紫外、可见分光光度计于200～400nm波长范围扫描。结果该标准液在326nm处均有最大吸收峰,故选326nm为测定波长。2.1.2标准曲线制作分别精密吸取0.112mg/ml绿原
4、酸标准液0.23、0.46、0.92、1.38、1.84和2.30ml,用50%甲醇稀释至10ml,按上述方法测其吸光度,回归方程为C=-0.7844+18.3361Ar=0.999G。作者单位:南京野生植物综合利用研究所南京210042第18卷第1期中国野生植物资源332.1.3绿原酸提取率计算称取10g杜仲叶,粉碎后用溶剂浸提数次后过滤,合并滤液,减压浓缩至一定体积(绿原酸提取液)上D101柱,水洗,15%乙醇洗至绿原酸全部洗出。合并水和15%乙醇洗脱液,浓缩后真空干燥(绿原酸粗品),称重(经预处理后可以除去大部分干扰杂质)。精密称取适量绿原
5、酸粗品用50%甲醇溶解,过滤定容至10ml。用微量进样器准确吸取上述溶液,在助干条件下,按细条状点于距新华1号层析纸1.5cm处,同时点绿原酸标准品液,以正丁醇:冰醋酸:水(4:1:5)混合后的上层液作展开剂,饱和后上行展开,展距13cm时取出,凉干,在紫外光下观察画出与标准品具有相同的Rf和颜色的荧光带,剪下,置带塞试管中,精密加入50%甲醇液10ml,反复振摇提取24hr,同时做空白,在324nm处测吸光度A。代入下式计算。(18.3361A-0.7844)×稀释倍数×10ml杜仲绿原酸粗品中绿原酸百分含量=×100%称取样品毫克数×1000
6、绿原酸粗品重(g)×绿原酸粗品中绿原酸百分含量绿原酸提取率=×100%10g2.2回收率试验精密量取杜仲绿原酸提取液若干ml,分成两份,其中一份加入1.12mg/ml绿原酸1ml(相当于绿原酸1120mg)按照2.1.3项预处理,点样,测定,并计算回收率,结果见表1。表1回收率试验结果＊表3试验计划、浸提结果及计算分析测定次数加入量回收量回收率平均值CN试验号ABCD绿原酸提取率(%)(μg)(μg)(%)(%)(%)111111.00111201136101.4212220.92313330.7021120110098.298.42.14421
7、231.0031120108496.8522310.66623121.4741120108797.1731320.94表2影响绿原酸提取率的因素水平表832132.05ABCD933211.71因子水平乙醇浓度%温度℃pH时间(h次)K12.622.944.523.3710502.50.5K23.133.633.633.33K34.703.882.303.75240707.01.0Q10.870.981.511.1237090121.5Q21.041.211.211.11Q31.571.290.771.25注:共提取3次,料∶液分别为1∶12,1
8、∶10,1∶8。R0.700.310.740.14＊表中A:乙醇浓度;B:温度℃;C:pH;D:h次。2.3绿原酸提取2.3.1制定因素
