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1、螺旋藻多糖PSP的化学结构研究1*22张芳,王,尹鸿萍12南京中医药大学药学院,南京210029;中国药科大学生命科学与技术学院,南京210009摘要目的:研究螺旋藻多糖硫酸脂的理化性质及化学结构。方法:采用高效液相色谱、气相色谱、特异性酶降解、高碘酸氧化、Smith降解、部分酸水解测定PSP的分子量、单糖组成、连接方式、糖苷键键型、主链和支链结构及分枝点。结果:螺旋藻多糖是由多种单糖组成的杂多糖,具有型糖苷键,主链部分以13键连接为主。结论:螺旋藻多糖是一种结构复杂的新型多糖。关键词螺旋藻;硫酸化多糖;结构分析中图分类号Q539文献标识码A文章
2、编号16723651(2005)03015503近年来不断发现硫酸多糖具有多种生物活2实验方法性,如增强机体免疫机能、抗肿瘤、抗病毒等,特别是该类多糖的抗病毒研究十分活跃,有可能成为21提取纯化继病毒逆转录酶活性抑制剂、蛋白酶抑制剂之后干燥螺旋藻粉,热水(pH10)提取8h,离心合的又一类潜在的新型抗病毒药物硫酸化多糖,目并上清液,减压浓缩至小体积,乙醇二次沉淀,沉前的研究成为多糖领域中的一个热点。本文报道淀物用无水乙醇洗涤,干燥后得粗多糖。粗多糖一种新型的硫酸酯化螺旋藻多糖,并对其化学结以CTAB络合,盐解后用离子交换树脂吸附,上清构进行了初步研究。液乙醇沉淀干燥后得精
3、制螺旋藻多糖(PSP)。22结构鉴定1仪器与试剂[1]221纯度及分子量测定D葡萄糖(Glc,上海化学试剂公司),D肌醇采用高效凝胶渗透色谱(HPGPC)检测多糖的(Ino,上海伯奥生物公司),D核糖(Rib)、L鼠李糖纯度和分子量。(Rha)、D葡萄糖醛酸(GlcAc)、D半乳糖醛酸先采用标准硫酸化葡聚糖(Dextransulfate系(GalAc)、D(+)盐酸氨基葡萄糖、Dextransulfate列)制作标准曲线,然后根据多糖样品在相同色谱(DS)系列均为Sigma公司产品,Sephadex系列条件下的洗脱体积或保留时间,从标准曲线上求(Phamacia),
4、淀粉酶(Sigma),纤维素酶(日本出样品的分子量。YakultHonsha公司),强酸型阳离子交换树脂。样品以0001mol/LNaCl溶解,浓度2mg/ml,WatersHPLC系统(ultrahydrogel500及2000之进样量20l,流动相为0001mol/LNaCl,流速05二串联柱,WatersHPLCpump,Waters2410refractiveml/min。indexdetector,WatersUV2487。);752紫外光栅分光222糖组分分析[2]光度计(上海精密仪器厂);惠普6890气相色谱仪多糖PSP样品15mg,溶于2mol/L三氟乙酸(H
5、P5%苯甲基硅烷毛细管柱(30m025mm(TFA)15ml,充氮气封口,110油浴2h,60025m)N2流速:恒流模式13ml/min;程序升温:减压蒸干,除尽TFA,再加入少量蒸馏水使样品溶110至124,02/min;124至126,解,然后按照同时测定多糖样品中醛糖和糖醛酸3/min;126至280,10/min)。的方法制备衍生物并进行气相色谱分析。223硫酸基含量测定及N硫酸基/总硫酸基的收稿日期20040507[3]*通讯作者张芳:助教,Tel:02585811516比值测定按照BaCl2明胶法测定样品中硫酸
6、基含量,并中国天然药物2005年5月第3卷第3期ChinJNatMedMay2005Vol3No3155CJNM[3]参考文献方法测定N硫酸基/总硫酸基。从HPLC图谱可见,PSP样品中含有两个组[5]224糖苷键键型分析分,其中分子量16万的组分积分面积占967%。多糖PSP样品2mg分别用唾液淀粉酶及纤维另一小分子量组分含量很低。素酶酶解,37水浴,酶解48h(中间补加酶),二33糖组分分析结果甲苯防腐,酶解液用SephadexG100层析,流出液单糖组成及摩尔比测定结果如图2所示苯酚-硫酸法检查。[3,4]225高碘酸氧化及Smith降
7、解取多糖PSP样品加入适量高碘酸钠溶液,配成约01%的溶液,置于4条件下于暗处放置,间或振摇,测定223nm处光密度。直至达一稳定值,加适量乙二醇搅拌。透析后减压浓缩至小体积,NaBH4以还原多糖醛,乙酸调pH55,冻干得多糖醇。取上述多糖醇10mg,2mol/LTFA,110水解,减压浓缩至干后制备成糖醇乙酸酯衍生物进Fig2Gaschromatogramofsimultaneousdetermi
