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《白芥子炒制前后HPLC指纹图谱的比较分析.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第35卷第21期Vol35,Issue212010年11月November,2010白芥子炒制前后HPLC指纹图谱的比较分析*张村,李丽,肖永庆,逄镇,李桂柳(中国中医科学院中药研究所,北京100700)[摘要]目的:研究建立白芥子不同饮片的指纹图谱测定方法,指认主要色谱峰,分析白芥子炒制前后化学成分的变化-1情况。方法:采用HPLC,AgilentTC-C18(2)柱,乙腈-01%磷酸溶液梯度洗脱,检测波长254nm,流速10mLmin,柱温35,以指纹图谱软件计算相似度,并进行图谱比较和指认
2、。结果:各饮片10批次样品平均相似度大于096,确定了白芥子生品、炒制品的HPLC标准指纹图谱,并指认了5个主要色谱峰。结论:白芥子炒制前后的HPLC指纹图谱有明显差异,通过2种提取溶剂的比较分析结合色谱峰指认,为揭示白芥子的炒制原理提供了可靠线索。[关键词]白芥子;饮片;HPLC指纹图谱;指认白芥子为十字花科植物白芥SinapisalbaL的究组从白芥子中分离鉴定,经HPLC分析,纯度达到干燥成熟种子,首载于名医别录,列为上品,其性98%以上。味辛热,具有温中散寒、利气豁痰的作用。现代研究实验用白芥子药材产自安徽、四川等省,经中国
3、表明白芥子富含白芥子苷,能在芥子酶的作用下酶中医科学院中药研究所胡世林研究员鉴定为白芥子解为异硫氰酸对羟基苄酯(白芥子油)而发挥上述Salba,由安徽沪谯中药饮片厂按照2005年版中生物活性。但是由于芥子油有刺鼻的辛辣味及刺激国药典、全国中药炮制规范相关项下的炮制方作用,能使皮肤和黏膜发生水肿、水泡,大剂量则引法,分别制备成10批白芥子生品,10批白芥子炒制起强烈的胃肠道刺激。因此临床上多以其炒制品配品,供实验研究用。伍入方剂,以杀酶保苷,发挥药效,同时炒后种皮2方法与结果破裂,有效成分易煎出,充分发挥其利气散结等功21色谱条
4、件[1-2]效。AgilentTC-C18(2)柱(46mm150mm,5本研究通过系统的方法学考察,首次以2种提m)。流动相乙腈(A)-01%磷酸溶液(B)梯度洗取溶剂建立白芥子生品、炒制品的HPLC指纹图谱脱,0~10min,2%~15%A,10~15min,15%~测定方法;通过对白芥子饮片不同提取溶剂的30%A,15~25min,30%~45%A,25~30min,HPLC图谱的比较分析,结合白芥子的化学成分研45%~100%A,30~35min,100%A;柱温35;检究,对其主要色谱峰进行归属和指认,为深入诠释白-1测波长2
5、54nm;流速10mLmin,在此条件下样芥子炒制原理的科学内涵提供实验依据。品分离较佳,以甲醇和水为溶剂分别能检出14,191材料个色谱峰。Waters高效液相色谱仪(Waters2695Separa-22对照品溶液的制备32tionsModule,Waters2996PAD检测器,Milennium取各对照品适量,分别加适量甲醇溶解,以微孔数据处理软件);超声清洗器KQ-500DB(昆山市超滤膜(045m)滤过,即得。声仪器有限公司);甲醇、乙腈为色谱纯,水为纯净23供试品溶液的制备水,使用前均经045m滤膜滤过;其他试
6、剂均为取白芥子不同饮片粉末(过40目筛)各1g,精分析纯。色谱峰指认用芥子碱复盐等对照品为本研密称定,置具塞锥形瓶中,分别精密加入甲醇、水各25mL,密塞,称重,冷浸6h后超声提取20min,放[稿件编号]20100520009冷,密塞,再称重,以相应溶剂补足失重,摇匀,滤过,[基金项目]国家十一五科技支撑计划项目(2006BAI09B06-01);国家重大新药创制科技重大专项(2009ZX09301-005-03)取续滤液,以微孔滤膜(045m)滤过,即得2种供[通信作者]*肖永庆,研究员,博士生导师,Te:l(010)840
7、40221试品溶液。2842第35卷第21期Vol35,Issue212010年11月November,201024参照峰的选择以选择的流动相进行梯度洗脱,采用相对保留时间标定共有指纹峰,即以芥子碱复盐对照品色谱峰(MeOH提取为8号峰,水提取为12号峰)作为参照峰,分别进行各饮片相对保留时间和相对峰面积的计算。25方法学考察251精密度试验取白芥子生品2种溶液各10L,分别连续进样5次检测指纹图谱,结果2种提取溶剂各色谱峰相对保留时间RSD001%~11%,相对峰面积RSD
8、048%~15%,说明仪器精密度良好。252稳定性试验取白芥子生品2种溶液各10L,分别在0,3,6,9,12,24h检测
