肺炎衣原体ompA基因VD2-VD3区重组蛋白在血清学诊断中的.pdf

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1、!"卷#期微生物学报!（"#）：’($)’(&$%%"年&月!日!"#$%&"’()&(*(+&"$,&-&"$!*+,-$%%"!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!肺炎衣原体!"#$基因%&’(%&)区重组蛋白在血清学诊断中的初步应用周洲，吴移谋"，刘!，陈超群，杨玲（南华大学病原生物学研究所衡阳!$(%%$）摘要：应用聚合酶联反应（EFG）技术，从肺炎衣原体!"#$%&’($)*+,%-*($+的主要外膜蛋白（H4I;J

2、K+D-JH-8LJ4,-EJ;D-9,，HKHE）编码基因（;8M.）上扩增出抗原优势表位NO$/NO#区基因，构建原核表达系统并诱导表达重组蛋白，经P9/P0.亲和层析法纯化表达产物。间接酶联免疫吸附试验（7,B:8-19,Q988+,;>;JL-,D4>>4:，7RST.）检测人血清中特异性SUV抗体。试验表明，转化入WR$(大肠杆菌的重组质粒，能表达并纯化出相对分子质量（./）为$!XO的重组蛋白。Y->D-J,L1;D证实重组蛋白只与FM,HKHE8.L发生特异性反应；重组蛋白用作7RST.包被抗原检

3、测FM,阴阳性参比血清，特异性和灵敏度均为(%%Z；对($&位冠心病患者血清进行的检测中，该间接7RST.法与晶美公司FM,SUV7RST.诊断试剂盒的检测结果相比，符合率达到6&[#Z。结果证实，制备的重组蛋白HKHENO$/NO#具有良好的免疫活性，在FM,血清学诊断的应用中具有较大的利用价值。关键词：肺炎衣原体；主要外膜蛋白；血清学试验；酶联免疫吸附试验中图分类号：G#"![#文献标识码：.文章编号：%%%(/&$%6（$%%"）%#/%’($/%’肺炎衣原体（!"#$%&’($)*+,%-*($+，FM

4、,）是(626（H4I;JK+D-JH-8LJ4,-EJ;D-9,，HKHE）。其中，相对年被正式命名的新衣原体种，是一种重要的呼吸道分子量（HJ）为!%QO的HKHE，免疫原性强，能刺激病原体，常引起人类呼吸系统感染，同时与冠心病、机体产生强烈的保护性免疫，是机体体液免疫反应［(］［’］心肌梗死及脑血管等疾病的发生密切相关。FM,的主要目标，成为FM,诊断试剂的主要候选抗原的人群感染极为普遍，血清流行病调查显示，成人中之一。尽管HKHE早已作为抗原被应用于FM,诊［$］FM,的抗体阳性率可达’%Z)"%Z，临

5、床上多以断试剂盒的研制中，但是，衣原体间（沙眼衣原体、鹦隐形、持续性感染的形式存在。感染反复迁延，造成鹉热衣原体及肺炎衣原体）交叉抗原的存在导致了病理变化，可导致复杂的并发症。因此，有必要建立检测结果的非特异性，因此，目前还没有一种仅针对一种简单、高效、快速的诊断方法，为早期诊断、早期FM,的诊断试剂盒能在全球范围内被推广应用。本［&］治疗FM,感染提供实验依据，以预防FM,相关心脑文根据FM,全基因测序结果，将FM,.G/#6株的血管疾病发生。;8M.通过软件分析，筛选HKHENO$/NO#区优势抗原表［#］

6、FM,是目前公认较难培养的衣原体种，分离位基因进行克隆与表达，对重组蛋白的免疫活性进培养的困难严重阻碍了抗原的制备，更限制了血清行检测，并以重组蛋白为包被抗原建立间接7RST.学诊断的开展和疫苗的研制。目前认为通过基因工法，对($&名冠心病患者血清进行检测，初步评价其程方法获得FM,重组抗原是制备检测试剂盒和研制作为诊断抗原的可行性及在临床检测中的应用［!］疫苗的较好途径，该方法不仅解决了抗原来源及价值。抗原污染问题，也避免了全菌抗原与多种病原体的*材料和方法交叉反应，从而提高其在血清学诊断中的特异性。目前已知

7、具有免疫原性的FM,蛋白有多种，而*+*材料应用于研究工作的主要有：(’QO4的FJM.、孔蛋白/L*+*+*基因组OP.模板：FM,标准株.G/#6基因组（E;JW）、>M&%、&%QO4的K8M$以及主要外膜蛋白OP.模板由美国德州大学圣安东尼奥健康科学中基金项目：湖南省卫生厅重点课题资助项目（.%#/%%&）"通讯作者。0-1：2&/"#!/2$2(’’’；345：2&/"#!/2$2$6%"；7/8491：:98;+<+=>9,4?@;8作者简介：周洲（(62%A），女，湖南常德人，讲师，硕士，研究方

8、向为肺炎衣原体的诊断与防治。7/8491：>+>9-BC;+66=C;D8491?@;8收稿日期：$%%&/(%/#%；接受日期：$%%&/((/$6；修回日期：$%%"/%(/#%周洲等：肺炎衣原体AF,9基因U)(2U)+区重组蛋白在血清学诊断中的初步应用QT微生物学报（($$X）K（X+）M#+心免疫和微生物学系钟光明教授惠赠。及测序鉴定确认后，重组质粒转化至表达宿主菌!"!"#