重组戊型肝炎病毒衣壳蛋白工程菌的高密度培养.pdf

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1、!"卷#期生物工程学报&’()!"*’)#!""$年%月!"#$%&%’()*$+,(-.#(/%0"$(,(12+,-!""$!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!重组戊型肝炎病毒衣壳蛋白工程菌的高密度培养0000!刘如石何志强李少伟杨坤宇鲜阳凌!0!0"逄淑强张军李益民夏宁邵（0厦门大学细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室，厦门#50""%）（!北京万泰生物药物有限公司，北京0"!!""）摘要在0"B发酵罐中对戊型肝炎病毒衣壳蛋白在重组大肠杆菌中表达发酵工艺进行了研究，用分批培养方法探讨了不同培养

2、基、培养基中磷酸盐浓度和+>!C浓度等因素对菌体生长与重组蛋白表达的影响；用分批补料培养研究了不同的补料工艺对菌体生长与重组蛋白表达的影响，同时对重组菌诱导时期、诱导持续时间以及不同诱导温度表达包含体在尿素溶液中的溶解性进行了研究。结果表明，在优化后的培养基中，磷酸盐浓度、+>!C浓度分别为4"88’(DB与!"88’(DB时菌体生长与表达效果较好；分批补料培养中，#EF培养/G菌体达到对数期中期（约$%345""）为适宜诱导时期，加入终浓度为0H"88’(DBIJ2K后诱导%G，345""达到4"以上，重组蛋白表达量达到!/HE$L，为最适收获菌体时间；#EF表达的包含体4"L以上溶解在$

3、8’(DB的尿素溶液中，最终浓度达到0$8>D8B；0"B发酵罐中确定的发酵工艺参数在#"B发酵罐中进行了放大培养，0"B发酵罐中确定的发酵工艺参数在#"B发酵罐上具有可放大性与重复性，可以应用于工业生产。关键词戊型肝炎病毒，衣壳蛋白，重组大肠杆菌，高密度培养中图分类号2M/!"H0文献标识码N文章编号0""".#"5（0!""$）"#."$%"."5戊型肝炎病毒（O7&）是近年新发现的一种经胃肠道传!材料和方法播的急性病毒性肝炎，其基因组共编码#个开放阅读框（’P3:Q3,@9:>RQ,83）ST10、ST1!、ST1#，其中ST1!是编码55"!"!材料［0］个氨基酸的病毒主要结构蛋白，

4、组装成病毒衣壳。戊肝疫!"!"!菌株和质粒：宿主大肠杆菌7T!%55购于*3Z7:>(,:@苗迄今尚未研制成功，但是研究已经发现多个ST1!重组蛋X9’(,Y;公司。重组质粒P2S.2E.!#/和重组菌株5)0(,#［/］白具有免疫保护作用，表明ST1!蛋白上存在主要的中和表7T!%55DP2S.2E.!#/由本实验室构建。［!U$］位，我们以前的研究发现,,#/$.5"5段蛋白（*7!）可以形!"!"#仪器：XIS[2N2.X0"B、XIS[2N2.W#"B自动发酵罐，成同源二聚体与多聚体形式，对戊型肝炎急性期与恢复期血都与微机连接，由+1W[DZ9:!H"软件控制发酵过程，为德国清都有很

5、强的反应，同时将该片段免疫恒河猴后，可以产生X)XQ,?:X9’3AG公司产品；5]0%型高速冷冻离心机为[9>8,良好的保护性。但是其免疫原性强烈地依赖于其聚体形式，公司产品；BNX.!"""型实验室用均质机，为美国NJ&公司产［%U/］而且纯化后的免疫原性有所下降。为了找到具有更好品；微量蛋白电泳仪为X9’.T,@公司产品；7PP3:@’QRRX9’PG’.免疫原性的颗粒抗原，我们进一步表达了一系列*7!的突’833Q分光光度计，德国7PP3:@’QR公司产品；^&凝胶成像变体，发现ST1!,,#54.5"5重组蛋白（O7&!#/蛋白）可以形系统为美国^&I公司产品。成0%V#":

6、8的颗粒，O7&!#/颗粒可与戊型肝炎患者血清发!"!"$主要化学试剂：酵母膏、蛋白胨为英国S6’9@公司产生很强的反应，两个与抗O7&中和性单克隆抗体4W00和品，蛋白浓度测定XWN试剂为美国J93QA3公司产品，无机盐［/，0"］4O#均有很强的反应。O7&!#/与*7!蛋白分别免疫与葡萄糖为国产分析纯试剂，消泡剂“泡敌”为江苏淮阴赛欧X,(YDA小鼠，结果O7&!#/的抗体阳转率与抗体滴度明显优消泡剂有限公司产品。［/］于*7!蛋白；O7&!#/免疫恒河猴，可以对同型与异型病毒!"#方法攻击均产生很好的保护性，因此具有成为疫苗的良好前!"#"!种子菌的活化：取在UE"F甘油中保存的菌株

7、平板［%，4］景；本研究中，我们对重组菌的生长与表达规律进行了探划线，#EF培养约0"G，挑典型单菌落接种于含0L葡萄糖的索，建立了稳定的高密度、高表达生产工艺。#8BBX培养基（含卡那霉素%"8>DB）的试管中，#EF、!""收稿日期：!""#."/."$，修回日期：!""$."0.0#。基金项目：福建省重大科技项目（*’)!""!1"0#），教育部跨世纪优秀人才培养计划。"通讯作者。23(：45.%/!.