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1、猪戊型肝炎病毒swCH189株衣壳蛋白基因CP239片段原核表达条件的优化第50卷第15期2011年8月湖北农业科学HubeiAgriculturalSciencesV0l_50No.15Aug.,2011猪戊型肝炎病毒swCH189株衣壳蛋白基因CP239片段原核表达条件的优化郝宝成1,2梁剑平'一,兰喜,刑小勇,项海涛3温峰琴3胡永浩3柳纪省2,3(1.中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所/新兽药重点开放实验室/甘肃省新兽药工程重点实验室,兰州730050;2.中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部
2、畜禽病毒学重点开放实验室/农业部草食动物疫病重点开放实验室,兰州730046;3.甘肃农业大学动物医学院,兰州730070)摘要:为了提高猪戊型肝炎病毒swCH189株衣壳蛋白基因CP239片段在大肠杆菌中的表达量.研究了载体,温度,转速,诱导时间以及诱导剂IG浓度等不同条件对衣壳蛋白基因C户239片段融合蛋白表达量的影响.结果表明.用LB培养基于37℃培养3.5h后.采用终浓度为0.3mmo儿的IPTG在37℃,200r/min诱导培养4h.pET32a—CP239融合蛋白表达量最大:SDS-PAGE检测结果表明pET32a—CP
3、239融合蛋白的分子质量与预期大小一致,约为45.3ku;Westernblotting结果表明.pET32a—CP239融合蛋白可以与抗一HEV阳性血清发生特异性反应.并具有良好的反应原性.说明衣壳蛋白基因CP239片段蛋白得到正确表达关键词:猪戊型肝炎病毒:衣壳蛋白;CP239片段;原核表达中图分类号:Q786文献标识码:A文章编号:0439—8114l2011)15—3l16—04OptimizationofProkaryoticExpressionforCapsidProteinGeneCP239intheswCH189St
4、rainofSwineHepatitisEVirusHAOBao-cheng1,2LIANGJian-ping1,3LANXiz,XINGXiao-yong~,XIANGHai-tao3,WENFeng-qin,HUYong-hao3,LIUJi-xingz'(1.LanzhouInstituteofAnimalandVeterinaryPharmaceutiesSciences,ChineseAcademyofAgriculturalSciences/Keylaboratoryofnewanimaldmgproject/Keyla
5、boratoryofnewanim~dmgprojectofGansuProvince,Lanzhou730050,China;2.ChineseAcademyofAgnculturalSciences,LanzhouVeterinaryResearchInstitute/livestockdiseaseStateKeyLaboratoryofPathogenBiology/MinistryofAgricultureKeyLabomtoryofAnimalVirology/DepartmentofAculturefocusedonp
6、lant-eatinganimaldiseaselaboratoryinLanzhou,Lanzhou730046,China;3.GansuAgriculturalUniversity,AnimalMedicalCollege,Lanzhou730070,China)Abstract:ToimprovetheexpressionquantityofcapsidproteinsgenesCP239fragmentofswinehepatitisEvirusswCH189strainsinEscherichiacoli.,theinf
7、luenceofvector,temperature,rotatingspeed,inductingtimeandIPTGconcentrationontheexpressionquantitywasanalysed.TheresultsshowedthatthefusionproteinexpressionamountofpET32a-CP239wasthelargestaftercultivated3.5hwithLBat37oCand4hinductingculturedwith0.3mmol/LIPTGat37℃.200r/
8、min.Themolecularweightwasdeterminedas45.3kubySDS-PAGEelectrophoresiswhichwasagreementwithprediction.TheWesternblottin
