有效活菌数的测定方法_允许差与判定_李元芳.pdf

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1、土壤肥料1997(4)技术有效活菌数的测定方法、允许差与判定讲座李元芳(农业部微生物肥料质检中心北京100081)摘要微生物肥料的有效活菌的数量是微生物肥料质量好坏的关键指标。根据NY227-94微生物肥料标准的规定,有效活菌数用平板计数法测定。该文就平板计数法规范化操作的有关规定作了说明。又对测定平板上菌落允许差、计算公式及判定规则进行了介绍。该文有较强的可操作性,对工厂企业按标准提高自检的准确性有重要的参考价值。关键词微生物肥料有效活菌数平板计数法允许差判定施用微生物肥料,就是把大量有益微生物法、允许差与判定的有关规定加以说明。施入到农作物根际土壤中,并通过它们的活动1有效活

2、菌数的测定来提高土壤肥力,刺激作物生长和抑制有害微生物的活动。因此,1994年公布的NY227-94采用平板计数法测定有效活菌数,测定时微生物肥料标准,再次以法制形式规定有效活采样不少于500g,从中称取10.0g,加入带玻璃菌数作为微生物肥料质量的关键指标。珠的100ml的无菌水中(液体菌剂取10ml加近几年来,我国微生物肥料发展很快,并出入到90ml的无菌水中),静置20min后,在旋现一些新品种和新剂型。但据我们从市场和厂转式摇床上200r/min上充分振荡30min,即制家收集到一些经企业检测认为质量达标的微生成母液菌悬液。物肥料产品,按NY227-94有效活菌数的测定用

3、5ml无菌吸管准确吸取5ml上述母液方法进行了检测,有相当一部分产品的有效活菌悬液加入到45ml的无菌水中,摇匀成1∶10菌数达不到标准的要求。据调查,目前尚有的工稀释的菌悬液,再依次稀释,最终分别得到1∶厂,仅用血球计数板或显微镜计数法进行样品2341×10、1∶1×10和1∶1×10等浓度稀释液有效活菌数的测定,这种方法虽然快捷,但有一待用(注意:每个稀释度必须更换无菌吸管!)。定局限性,不易区别细菌的细胞和有机颗粒,特每个样品取3个连续适宜稀释度,用别是不能区分活菌或死菌,结果往往使计数量0.5ml无菌吸管分别吸取不同稀释度菌悬液偏高;有的工厂虽也用了菌落平板记数法,但方0

4、.1ml,加至已事先准备好的9cm平皿的琼脂法不规范,如不设3个稀释度或3个稀释度不培养基表面,用无菌光滑的自制玻璃三角刮刀成梯度,或菌落不做显微镜观察确认,或平板重轻轻地将菌悬液均匀地涂抹于琼脂培养基表面复数不做统计分析,只要是平板上出现了菌落就记数计算,如稀释至10-8次平板上出现了一(注意:不要将琼脂培养基表面刮破)。每一稀释个菌落,就折算成每克样品有1亿个菌,这样的度重复3次,同时要有加无菌水空白对照,培养计数结果误差很大,不能反映样品中的实际活2～5d(培养皿倒扣),每个稀释度平板取5～10菌含量。为了贯彻执行NY227-94微生物肥料个菌落的菌体,进行涂片染色在显微镜

5、下观察标准,强化标准意识,加强产品质量标准及检验识别后,再取长有30～300个菌落的平板计数规范化仍很必要。本文将有效活菌数的测定方及统计分析。—43—土壤肥料1997(4)--2当x=43时,x-x=2.7,(x-x)=7.29。2允许差--2当x=32时,x-x=-8.3,(x-x)=平板计数法检测中,每个样品3个连续的68.89。--2稀释度成梯度时,选一个适宜稀释度(菌数在当x=46时,x-x=5.7,(x-x)=32.49。30～300个之间的平板)计数。同一稀释度的重7.29+68.89+32.49SD==±7.37复平板上菌落允许差按下列公式计算,并应符3-1合下列

6、公式的规定,见表1。写成40.3±7.4(-)-2΢(x-x)3判定SD(σn-1)=n-1式中:微生物肥料产品质量检测执行全数值比较SD(σn-1)—单一标准差法,即将检验所得的测定值作修约处理,应在数x—同一稀释度任一个平板测定值值后面加“(+)”或“(-)”,或不加符号,以表明-x—同一稀释度平板测定的平均值它是经进、舍或未进、未舍而得。再用数值的全n—同一稀释度平板重复次数部数字与标准规定的极限数值作比较,只要越΢—连加符号。出规定的极限数值都判为不符合标准要求。示表1平板菌落数允许差例见表2。平板上菌落数30.0～50.051.0～100.0101.0～300.0平板计

7、数法的测定值符合标准规定的允许(个/皿)差后,方可用以下公式计算样品的有效活菌数:单一标准差±≤10.020.050.0有效活菌数(个/g)=菌落平均数×稀释倍数×示例:母液菌悬液体积(ml)1×菌剂克数或毫升数接种量(ml)测定平板菌落数(个/皿),重复1-43;重复2-32;重复3-46。按公式计算如下:-43+32+46x==40.33表2有效活菌数的测定误差与判定测定值稀释平板检测中允是否符菌数平均数许误差平板菌落数(个/皿)单一标准差合要求(个/皿)σn-1≤σn-1重