芦荟组织培养.doc

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1、芦荟是百合科芦荟属多年生常绿多肉质草本植物。近年来，由于芦荟化学及药理学研究的深入，巳形成了一股世界性的芦荟保健热。芦荟的栽培产业也已开始在我国兴起，但由于芦荟不能自花授粉结实，因此，用种子繁殖非常困难。目前的繁殖方法主要是分株和分麋,但难以快速、大量地繁殖种苗，这也是当前芦荟种苗昂贵的重要原因之一。本文介绍一种对芦荟茎尖进行组织培养快速繁殖试管苗的技术，利用这项技术可在短期内繁殖上百万株的种苗，具有成本低，效益高的特点。播要:以MS+6-BA2.5mg/L+NAAo.2mg/L为初代培养基，以MS+6-BA2.0呵L+NAA^mg/L

2、为增殖培养基,1/3MS+IBAo.3mg/L为生根培养基,添加不同浓度的PP如其结果表明:初代培养基中添加0・5mg/EPP血有利于库拉索芦荟外植体出芽禹殖焙养基中添加0・1-0.5mg/LPP血对库拉索芦誉试臂苗增殖有效，而在生根培养基中添加0・5~].0mg/LPIJ有利于生根和移栽,其中以1/3MS+IBAqjmg/L+PP3330.5mg/L培养基对库拉索芦荟试管苗生根和移栽有良好效应・关键词澤拉索芦荟;PP如组织培养一、材料和培养基MS+BA3.Omg/L+NAAO.2mg/L+3%蔗糖+0.8%琼脂”为中华芦茎较优的初代培

3、养基•MS+BA3.Omg/L+NAAO.2mg/L+3%蔗糖+0.8%琼脂”为中华芦荟较优的继代培养基。KC+NAA1.0mg/L+3%蔗糖+08%琼脂”更佳，诱导15d即可生根25d分化根量平均达4.8条，且根的分支较多，吸收能力强。筛选到中华芦荟丛生芽诱导的最优培养基为:MS十2.Omg/L6-BA+0.3mg/LNAA+30G/L蔗糖。筛选到中华芦荟丛生芽生根的最优培养基是：1/2MS+O.05%PVP+0.2mg/LNAA+O.2mg/LIBA+30g/L蔗糖。10-15cm高的芦荟幼苗；愈伤组织诱导培养基为MS+(1—6mg

4、/L)BA+(0.1一0.5mg/L)NAA;分化培养基为MS+(2-4mg/L)BA+(0.1-0.5mg/L)NAA;生根培养基为MS+(0.1一0.5mg/L)IBA+(2—5mg/L)PP33o二、繁殖方法(%1)愈伤组织培养将准备好的芦荟幼苗在清水中冲洗数次，剪去叶片和大部分茎段，取茎尖部分，再冲洗1-2次，淋干。在超净台上，先用75%的乙醇将茎尖浸泡30-60s,再用升汞浸5-10min,最后用无菌水冲洗数次。用解剖刀取出包括茎尖牛长点的组织切块，接种到愈伤组织诱导培养基上。培养条件为:每天光照10-12h,光照度为1000

5、—2000Lx,温度（25士）2°C。大约15-25d后，试管中接种的外植体就可以膨大，形成愈伤组织。愈伤组织的形成标志着接种的外植体的生长状态已脱离分化状态，开始重新恢复分生能力。愈伤组织形成1周后，就可将愈伤组织转管进行继代培养或分化培养。（二）继代培养将愈伤组织在无菌条件下，从试管中取出，用银子和解剖刀剔除附着在愈伤块上的培养基，并用无茵水反复清洗数次，直至愈伤块上无残留培养基为止。用解剖刀将愈伤块切成数个小块，再接种到装有愈伤组织诱导培养基的三角瓶中，在与诱导愈伤组织相同的培养条件下继续培养。几天后，三角瓶中的小愈伤块即可逐渐长

6、大，这一过程称作继代培养，可反复操作。通过愈伤组织的继代培养，原来接种的1个芦荟茎尖组织可繁殖出大量的新接种材料來，用于分化培养。（三）分化培养将愈伤组织在无菌条件下，从试管或三角瓶中取出，用无菌水洗净，切成小接种块，接种到装有分化培养基的三角瓶中，分化培养的条件同愈伤组织培养。大约30-50d后，愈伤组织就可分化出芽，并继续长出小叶片。当分化出的幼苗长到一定高度或分化出一定数量后，将这些小幼苗在无菌条件下取出，进行生根培养或重新诱导分化。（四）生根培养当三角瓶中的幼苗叶片长到3cm左右时，将幼苗在无菌条件下取出，放入装有生根培养基的三

7、角瓶中培养，培养条件同分化培养。大约半个月后，幼苗即可生根。（五）炼苗当幼苗的根长到一定长度，幼苗形体已显健壮时。将幼苗取出，在清水中洗除附着在根上的培养基（注意:一定要严格洗净，否则会烂根）。将洗净的幼苗排好，用清水喷湿，在15-25°C、湿度60%-80%的条件下炼苗24h,也可视情况缩短为12ho（六）移栽炼苗后，将幼苗移栽入由蛭石组成的驯化苗圃中驯化，每天定期给幼苗喷施驯化培养液和清水，大约15-20d后，视幼苗长势，即可移栽到苗圃中。三、注意事项1、配制培养基时，要严格精确地称取各种化学试剂。培养基中的蔗糖可用市售白糖来替代，

8、从而降低成本。高压灭菌条件为120°C,1.5kg/cm~,30mino每次接种前都要对接种室进行甲醛熏蒸和紫外线灭菌。2、在培养中，如果出现杂菌污染，应立即将该污染试管或三角瓶中的培养物倒掉并将试管或三角