人肝癌细胞株Survivin基因产物的表达及意义.doc

《人肝癌细胞株Survivin基因产物的表达及意义.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、人肝癌细胞株Survivin基因产物的表达及意义【关键词】肝癌【摘要】日的了解人肝癌细胞株SMMC-7721中survivin基因的表达情况，为进一步研究肝癌的发生与进展提供帮助。方法利用Westernblot法检测survivin蛋白在人肝癌细胞株SMMC-7721中的表达。结果Westernblot显示survivin蛋白在人肝癌细胞株SWC-7721屮存在着表达。结论Survivin基因的表达在不同的肝癌中都起到了抑制凋亡促进增殖的作用。关键词肝癌survivin细胞株〈Palign=ce

2、nterstyle二〃TEXT-INDENT:24px"〉Theexpressionofsurvivingeneproductinahumanhepatocellularcarcinomacellline(SMMC-7721)WangFang,LShen,CuiZhlining,etal.〈Palign二centerstyle二〃TEXT

3、-INDENT:24px〃＞Departmentofsurgery,TheFirstHospitalAffiliatedtoDalianMedicalUniversity,Dalianll6011.[Abstract]ObjectiveToinvestigatetheexpressionofsurvivingeneinahumanhepatocellularcarcinomacellline(SMMC-7721)andprovidesomeevidencesforfurtherresearch・

4、MethodsExpressionofsurvivinproteinwasevaluatedbywesternblotanalysis・ResultsSurvivinproteinexpressionwasdetectedinthehumanhepatocellularcarcinomacellline(SMMC-7721)・ConclusionTheexpressionofsurvivingenewhichindifferenthumanhepato~cellularcarcinomawasp

5、rovedthatitinhibitedcanfallenandpromptedproliferationofcells・Keywordshepatocarcinomasurvivincellstrain肝癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，其发生发展机制尚未完全阐明，但细胞凋亡的抑制在肝癌发生、发展中的作用不可否定。Survivin是凋「抑制蛋白(Inhibitorofapopto~sisprotein,IAP)家族成员之一，几乎表达于所有人类常见肿瘤组织中，而在正常成年终末分化组织中低表达甚至不

6、表达[1]o目前国内外对肝癌与survivin的研究报道较少，木实验对人肝癌细胞株SMMC-7721中survivin蛋口表达的情况进行了检测，从而了解人肝癌中有无survivin表达，并为进一步开展二者相关研究提供依据及帮助。1材料与方法1.1细胞培养传代人肝癌细胞株SMMC-7721购自中科院细胞库。细胞接种于含10%灭活小牛血清、100U/ml青霉素和100ug/ml链霉素的RPMI1640培养液，置于5%C02孵箱内培养。取对数生长期细胞用于实验。1.2蛋白提取将预冷至4°C的细胞裂解液

7、，加入到经PBS漂洗的培养细胞中，冰上作JU20min,12000g离心3min,上清液分装保存于-80°Co1.3SDS-PAGE电泳和免疫印迹采用紫外分光光度法测定蛋白质浓度，以200ug/孔上样，12%SDS-PAGE凝胶电泳分离，切部分凝胶直接以考马斯亮蓝染色，其余部分通过电转移法将蛋白质从SDS-PAGE凝胶转移至NC膜（硝酸纤维素膜）上，NC膜在含5%脱脂奶粉的TTBS中37°C封闭90min,加入兔抗人survivin多克隆抗体（购自SantaCruz公司，稀释度为1：500）,4

8、°C孵育过夜，TTBS漂洗（10minX3次），加入辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG（购自北京中山生物技术有限公司，稀释度为1：1000）,37°C作用4Oinin,TTBS漂洗（10minX3,DAB显色后观察结果。作者单位:1116011大连医科大学附属一院普外科2116027大连医科大学附属二院实验中心2结果考马斯亮蓝染色凝胶显示不同分子量的蛋白通过SDS-PAGE电泳分离出来,westernblot显示人肝癌细胞株SMMC-7721中有survivin蛋白的表达，DAB染色后在相对分子质