不同培养方式对灵芝中麦角固醇产量的影响研究

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1、北方园艺2014(04)：127～129·食用菌·不同培养方式对灵芝中麦角固醇产量的影响研究朱会霞(衡水学院生命科学系，河北衡水053000)摘要：以灵芝为试材，利用深层发酵法发酵生产麦角固醇，研究了连续发酵、分批发酵、补料分批发酵3种不同发酵方式对灵芝菌丝体、麦角固醇产量的影响。结果表明：相对于连续培养发酵，补料分批发酵灵芝菌丝体最大产量提高4．71％，麦角固醇产量提高17．35，到达菌丝体和麦角固醇产量最大的时间缩短24h。故补料分批发酵优于分批和连续发酵，有利于发酵灵芝真菌生产麦角固醇。关键词：灵芝；麦角固醇；补料发酵中图分类号：S567．31

2、文献标识码：A文章编号：1001一OO09(20l4)O4一O127—03麦角固醇为灵芝真菌菌丝体中重要的生理活性物萄糖3．6、氮源为蛋白胨0．4、pH6．0、酵母膏0．2、质之一，含量较高，药理应用广泛，在紫外线照射下，麦KH2PO40．1、MgSO·7H2O0．05、维生素B1角固醇可转化为维生素D2前体，是生产黄体酮、氢化可0．005。的松、维生素I)2等的主要原料，市场需求较大_】伽。1．2试验方法因人工栽培灵芝具有周期过长，费时、费力、不能控1．2．1培养方法种子液的培养为，经28℃活化24h制等缺点，而采用深层发酵法具有省时、省力、易于控

3、制的灵芝真菌斜面，接种铲切Icm2带培养基的菌丝体，无发酵条件、经济环保的特点，因此采用深层发酵灵芝真菌操作接种到经灭菌的三角瓶液体培养基中，装液量菌生产麦角固醇的方法。深层发酵培养又有不同的发150／500mI，转速100r／rain，培养温度28℃，培养时间酵方式，分别为分批发酵、补料发酵、连续发酵，不同发72h。酵方式具有各自的特点和优势[4]，该试验通过深层发酵1．2．2发酵培养连续发酵(工)：将培养好的液体灵芝培养研究了不同发酵方式对灵芝真菌菌丝体及麦角固真菌种子按8的比例接种于10L发酵罐中，发酵罐装醇的影响，以期找到最适宜的发酵方式。液

4、量7．5L，培养温28℃，转速100r／min，通气量100L／h，l材料与方法培养时间120h。分批发酵方法(Ⅱ)：经液体三角瓶培养的液体种子，按照8的接种量接种于装有7．5L发酵1．1试验材料液的发酵罐中，发酵过程中培养温度28℃，初始转速供试灵芝真菌(Ganodermalucidum)由衡水学院发100r／rain，初始通气量100L／h，发酵过程中不断提高转酵工程实验室提供；供试麦角固醇为标准品。速和通气量，转速提高量每天5Or／min，通气量提高供试仪器：1OI发酵罐(中国丽上海高机生物有限50L／d，培养时间120h。补料分批发酵培养(U

5、I)：初始公司)、高效液相色谱(AgilentllO0美国)、旋蒸仪(型号：葡萄糖浓度4％，发酵过程中流加5葡萄糖，维持发酵EV311莱伯泰科有限公司)、电子天平(上海田宫称重制罐中葡萄糖的量为2，培养时间120h，初始装液量5L，造有限公司)、分光光度计Uv．250(日本岛津)。培养温28℃，转速100r／rain，通气量100L／h。培养基：斜面培养基含葡萄糖20．0g／L、马铃薯1．3项目测定200．0g／L、MgSO4·7H2O1．5g／i、KH2P043．0g／L、1．3．1灵芝真菌菌丝体处理取发酵液，离心处理，维生素B10．01g／L、琼

6、脂20．0g／L；三角瓶种子培养基转速4000r／min离心15min，弃上清液，水洗菌丝体、含葡萄糖30．0g／I、黄豆粉lO．0g／I、酵母膏1．0g／L、再离心，至上清液不带发酵液颜色为止，收集菌丝体，MgSO~·7H2O0．5g／i、KH2P【)41．0g／L、维生素Bl恒温烘干至恒重，干燥器冷却至常温，称量，捣碎后，精0．01g／i、pH6．0，蒸馏水配制；发酵培养基的碳源为葡确称量1g样品置于500mL三角瓶中，添加2OmI甲醇溶液，超I界萃取，待静止后取上清液，0．45ITI滤膜作者简介：朱会霞(1977一)，女，博士，副教授，现主要从

7、事微生物发过滤后，量取体积，4℃保藏待用[5]。酵及食用茵等研究工作。Dmail：wztg8268@163．c0n1．3．2麦角固醇含量测定色谱条件：色谱柱安捷伦收稿日期：2O13—1O一22Cl8色谱柱200mmX4．6mm，5tLm，检测波长282nm，127·食用菌·北方园艺2o14(o4)：127～129测定柱温30℃，进样量l0L，流动相甲醇(色谱级)，流速1．2mL／min。标准品处理及标准方程建立：精确秤取标准品10mg，于5OmI容量瓶，无水乙醇定容至刻+连续发酵面5度，摇匀备用。精确称取麦角固醇标准品10mg，置于+分批发酵+补料分

8、批发酵50mI瘩量瓶中，无水乙醇定容、摇匀。分别移取经处理蓁后的麦角固醇标准品处理液，配置成0．05、0．1