高效液相色谱法检验操作规程.doc

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1、中国3000万经理人首选培训网站高效液相色谱法检验操作规程一、范围：本标准规定了使用高效液相色谱法的检验方法和操作要求；适用于本公司检品采用高效液相色谱法的质量检测。二、引用标准：中华人民共和国药典（2000年版二部附录）三、仪器的组成和一般要求：1、仪器的组成：高压输液泵；色谱柱；检测器；积分仪；打印机。2、对仪器的一般要求：所用的仪器为高效液相色谱仪。色谱柱的填充剂和流动相的组分应按各品种项下的规定。常用的色谱柱填充剂有硅胶和化学健合硅胶，后者以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶次之，氰基或氨基键合硅胶也有使用。离子交换填充剂用于离子交换色谱；凝胶

2、或玻璃微球等填充剂用于分子排阻色谱等。除另有规定外，柱温为室温，检测器为紫外吸收检测器。在用紫外吸收检测器时，所用流动相应符合紫外分光光度法（药典2000年版附录IVA）项下对溶剂的要求。正文中各品种项下规定的条件除固定相种类、流动相组分、检测器类型不得任意改变外，其余如色谱柱内径、长度、固定相牌号、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组分的比例、柱温、进样量、检测器的灵敏度等，均可适当改变，以适应具体品种并达到系统适用性试验的要求。一般色谱图约于20分钟内记录完毕。2.1紫外分光光度法项下对溶剂的要求：用1cm石英吸收池盛溶剂，以空气为空白（即空白光路中不置任何物

3、质），测定其吸收度。溶剂和吸收池所吸收度，在220~240nm范围内不得超过0.40，在241~250nm范围内不得超过0.20，在251~300nm范围内不得超过0.10，在300nm以上时不得超过0.05。四、系统适用性试验按各品种项下要求对仪器进行适用性试验，即用规定的对照品对仪器进行试验和调整，应达到规定的要求，或规定分析状态下色谱柱的最小理论板数、分离度、重复性和拖尾因子。1、色谱柱的理论板数（n）在先定的条件下，注入供试品溶液或品种项下规定的内标物质溶液，记录色谱图，量出供试品主成分或内标物质峰的保留时间tR（以分钟或长度计，下同，但应取相同单位）和半

4、峰高宽（Wh/2），按n=5.54（tR/Wh/2）2中国3000万经理人首选培训网站计算色谱柱的理论板数。如果测得理论板数低于各品种项下规定的最小理论板数，应改变色谱柱的某些条件（如信长、载体性能、色谱柱允填的优劣等），使理论板数达到要求。2、分离度分量分析时，为便于准确测量，要求定量峰与其他峰或内标峰之间有较好的分离度。分离度（R）的计算公式为：2（tR2-tR1）R=——————W1+W2式中tR2为相邻两峰中后一峰的保留时间；tR1为相邻两峰中前一峰的保留时间；tR1tR2W1及W2为此相邻两峰的峰宽。W1W2除另有规定外，分离度应大于1.5。3、重复性取

5、各品种项下的对照溶液，连续进样5次，除另有规定外，其峰面积测量值的相对标准偏差应不大于2.0%。也可按各品种校正因子测定项下，配制相当于80%、100%和120%的对照品溶液，加入规定量的内标溶液，配成3种不同浓度的溶液，分别进样3次，计算平均校正因子，其相对标准偏差也应不大于2.0%。4、拖尾因子为保证测量精度，特别当采用峰高法测量时，应检查待测峰的拖尾因子（T）是否符合各品种项下的规定，或不同浓度进样的校正因子误差是否符合要求。拖尾因子计算公式为：W0.05hT=————W22d1式中W0.05h为0.05峰高处的峰宽；W0.005hd1为峰极大至峰前沿之间的

6、距离。d1除另有规定外，T应在0.95~1.05之间。中国3000万经理人首选培训网站五、操作方法：定量测定时，可根据供试品的具体情况采用峰面积法成峰高法。测定杂质含量时，须采用峰面积法。1、外标法测定供试品中某个杂质或主成分含量。按各品种项下的规定，精密称（量）取对照品的供度品，配制成溶液，分别精密取一定量，注入仪器，记录色谱图，测量对照品和供试品待测成分的峰面积（或峰高），按下式计算含量：Ax含量（CX）=CR·——Ar式中符合意义：CX：为供试品（或其杂质）的浓度：mg/ml；AX：为供试品（或其杂质）峰面积或峰高；CR：为对照品的浓度：mg/ml；AR：为

7、对照品的峰面积或峰高。2、加校正因子的主成分身对照法：测定杂质含量时，可采用加校正因子的主成分身身对照法。在建立方法时，按各品种项下的规定，精密称（量）取杂质对照品和待测成分对照品各适量，配制测定杂质校正因子的溶液，进样，记录色谱图，按上述5.1法计算杂质的校正因子。此校正固子可直接载入各品种正文中，用于校正杂质的实则峰面积。测定杂质含量时，按各品种项下规定的杂质限度，将供试品溶液稀释成与杂质限度相当的溶液作为对照溶液，进样，调节仪器灵敏度（以噪音水平可接受可限）或进样量（以柱子不过载为限），使对照溶液的主成分色谱峰高约达满量程的10%~25%或其峰面积能准确积分

8、（面积约为