土壤dna提取的解决专家

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1、土壤DNA提取的解决专家简介土壤样品含有大量的微生物，其中绝大部分的微生物都是无法直接实验方法培养进行繁殖和研究。从土壤样品中提取DNA是研究土壤微生物为表明该试剂盒的优势性，我们选择以下不同组织样品进行DNA最为有效的方法。目前从土壤样品中提取微生物DNA的方法主要提取实验，每个样品重复3次。有直接法和间接法。直接法是指把土壤样品放在裂解液中，经过有森林类样品：自然保护区森林土壤(广东黑石顶自然保护区)效的破壁方法使微生物的DNA全部释放到裂解液中，然后再进行和海南岛红树林保护区分离提取，如Zhou的方法。间接法是指将土壤放在一种的缓冲液矿石区样品：矿石区水底土壤(湿)和矿石区地

2、表土壤(干)中，如BufferPBS等，把微生物从土壤中分离出来，然后再进行耕地样品：稻田土壤，菜地土壤DNA的提取。间接法可大大降低土壤中腐殖酸，重金属盐对DNA有机物污染地表样品：污水沟衍泥和生活垃圾堆放区提取带来的影响，但是这种方法会丢失许多微生物，得到的DNA并非土壤样品中的全基因组(宏基因组)，目前已经很少研究者会采操作方法（按HiPureSoilDNAKit试剂盒进行）简单描述以下：用这种方法。从土壤样品中直接提取DNA可最大可能性地获得全1.取0.5g土壤到2ml匀浆管中。加入0.9mlBufferSOL/SDS，基因组，但是这种方法却面临以下几个问题：高速涡旋5-1

3、0分钟裂解细菌或真菌。o1.腐殖酸的污染。土壤中，特别是森林，草地土壤含有非常丰2.70C水浴10分钟进一步裂解细菌。富的腐殖酸。腐殖酸是一系列的有机物分子，部分分腐殖酸3.加入0.3mlBufferPS涡旋混匀；同核酸分子非常类似，在纯化过程中非常难于去除。微量的4.加入0.3mlAbsorberSolution，涡旋混匀。腐殖酸污染都会导致下游应用，如PCR，酶切的失败。5.13,000xg离心5分钟。2.裂解方法。土壤样品中含有各种微生物，如细菌和真菌等。6.取上清。加入结合液混匀后上柱。革兰氏阳性细菌和真菌都含有非常厚的细菌壁，让这些微生7.洗涤柱子三次。物的细胞壁有效破裂是提

4、取高产量宏基因组DNA的关键。由8.加入适当量的ElutionBuffer洗脱即可。于土壤样品的复杂性，使用酶法(如溶菌酶，破壁酶，蜗牛酶)或液氮研磨都不可行，因为土壤中含有各种金属离子或抑制实验结果因子导致消化酶的活性失活，或土壤中的沙粒等会导致液氮1.DNA电泳结果研磨很难进行。取10ul纯化的基因组DNA上样于0.8%琼脂糖凝胶，80V电泳303.DNA得率难于控制。土壤样品或因肥沃，或因贫瘠，或因含分钟，结果如下。水量丰富，或因干枯，或因取样的深浅度，都会造成微生物数量和品种发生剧烈改变。在一个小范围的土壤样品DNA含量往往会差别成千上百倍。此外，某些土壤中含有的化学成分，如重

5、金属盐，粘土物质都会造成DNA得率降低。0.5g森林类土壤样品Magen公司的HiPureSoilDNAKit采用硅胶柱纯化技术，是(前两个自然保护区森林土壤，后两个为红树林土壤)专门为土壤DNA提取为设计的。该试剂盒采用玻璃珠研磨法和热激化学破壁法，可不需特殊的珠磨仪，在涡旋仪就可进行，适合于广大的研究室。试剂盒中AbsorberReagent是Magen公司独家开发的腐殖酸吸附剂，能高效去除各种腐殖酸的污染。此外还采用无醇的硅胶柱纯化方式，可高效去除土壤中各种可溶性金属盐，以及其它可溶性的抑制因子。该试剂盒已经成功地提取如下土壤(部分0.5g耕地类土壤样品是客户反馈)：自然保护区森

6、林的土壤(长达30-40年森林土壤，表A:水稻田土壤,B:玉米土壤层有30-50cm落叶层)，红树林土壤，草地，耕地，海底泥，污泥，矿石区泥土，有机物污染的泥土，池塘泥，垃圾泥，空调管道堆积物等。A:生活垃圾堆放地,B:污水沟底泥产品信息CAT.NoPrepsPrices从小于0.5g土壤样品中分离DNAD3142-02501158D3142-032505490从小于10g的土壤样品中分离DNA1和3是两个矿石区水底土壤(湿)D3143-02108682和4矿石区地表土壤(干)D3143-035041252.DNA纯度和产量分析试剂盒的内容：土壤A260/产量BufferSOL,Bu

7、fferSDS,BufferSP,BufferBD,BufferGW2,A260A280A230类型A280ugElutionBuffer,AbsorberReagent10.17920.10410.10751.79HiBindDNAMiniColumn,2mlCollectionTube20.21070.11950.12571.8112ml匀浆器30.12440.07300.07591.7640.14770.08550.09001.77常