实验室土壤dna提取方法

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1、改良CTAB-SDS法1、称取1g土壤样品，加1mlDNA提取液（0.1mol/LTris-Hcl；0.1mol/LEDTA；0.1mol/L磷酸钠；1.5mol/LNacl；1％CTAB；pH8.0,将各种试剂按配置的体积数称量混合即可。），在漩涡震荡仪上混匀。2、加入100ul溶菌酶温和37℃裂解30min,液氮冷冻10min，65℃水浴10min，反复冻融3次。3、加入20％SDS缓冲液溶液100µl，65℃水浴2h，每20min轻轻颠倒几次。8000r/min离心10min，取上清。4、剩余残渣中再加500µlDNA提取液和100µlSDS缓冲液

2、，65℃水浴30min，8000r/min室温离心10min，取上清，合并两次的上清液。5、等体积的氛-氯仿-异戊醇（25：24：1）抽提2至3次(氯仿：异戊醇（24：1）抽提一次)，静置10min，12000rpm，10min取上清。6、加入0.1倍体积的NaAc和0.6倍体积的无水乙醇混匀，4℃沉淀过夜。7、13000r/min离心5min，70%乙醇清洗2次，30µlddH2O溶解。8、提取粗DNA在0.6%（1%）的Agrose，70V（100V）电压下电泳1.5h（40min）。注意事项：这个千万不要4℃过夜啊，4℃过夜你会发现很多的絮状悬浮物

3、，我之前犯过类似错误，这个是SDS和高浓度的盐在低温条件下析出来了。室温放置1－2h就好。提取土壤微生物总DNA的纯度和浓度检测对提取的土壤微生物总DNA进行琼脂糖凝胶电泳检测,同时采用紫外分光光度计分别测定提取土壤微生物总DNA稀释液在230nm，260nm，280nm处的光密度值。以OD260/OD280（DNA/蛋白质），OD260/OD230（DNA/腐植酸）比值检测DNA纯度。DNA浓度=OD260值×50µg／ml×80×DNA溶液体积／干土质量[68]试剂的配置：1、0.1mol/LTris-HclTris（三羟甲基氨基甲烷），Mr=121

4、.14，称取12.114gTris溶解900ml的蒸馏水中，加水定容至1000ml。Tris-HCl缓冲液（0.05mol/L）50毫升0.1mol/L三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液与X毫升0.1mol/L盐酸混匀并稀释至100毫升。pH(25℃)X(mL)7.1045.77.2044.77.3043.47.4042.07.5040.37.6038.57.7036.67.8034.57.9032.08.0029.28.1026.28.2022.98.3019.98.4017.2分别配置0.1Mol/L的Tris和0.1Mol/L的Hcl溶液，然后用pH

5、计调到7.5。？？？？？3M醋酸钠□组份浓度3M醋酸钠（pH5.2）□配制量100mL□配置方法1.称取40.8gNaOAc•3H2O置于100～200mL烧杯中，加入约40mL的去离子水搅拌溶解。2.加入冰乙酸调节pH值至5.2。3.3.加入去离子水将溶液定容至100mL。4.4.高温高压灭菌后，室温保存。苯酚/氯仿/异戊醇□配置方法1.说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯/酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）。氯仿可使蛋白（25：24：1）质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。2.2.配置方法：将Tris-HC

6、l平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24：1）均匀混合后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。