橡皮树组织培养研究.doc

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1、橡皮树组织培养研究摘要：以橡皮树“黑金刚”茎尖为试材，研究了不同激素水平对橡皮树愈伤组织诱导、从生芽诱导、增殖和生根的影响，并对橡皮树试管苗的温室移栽技术进行了总结。关键词：橡皮树；组织培养；试管苗；移栽技术1材料与方法1.1材料材料采自乌鲁木齐市燕儿窝风景管理站温室，挑选健壮、无病害的橡皮树母株，取其嫩枝顶芽和茎段为材料。1・2试验方法表面消毒：从橡皮树植株上剪取茎段，剪掉叶片，先用自来水冲洗lOmin,再用洗洁剂溶液洗涤1〜2次。在无菌条件下，用75%的酒精浸泡50s,再用0.95%的次升汞溶液消毒18min,剪去材料的创伤面,留取0.5~l.OOn长

2、接种于培养基上。1・3培养基以MS为基本培养基，附加3%蔗糖及0.6%琼脂，灭菌前pH值调至5.8,按不同的培养日标添加相应的激素，配制成诱导分化、继代增殖、生根成苗培养基，常规方法灭菌。1・4培养条件培养温度为（25±3）°C,光照度为2000~2500Lx,每天光照12h。观察记录愈伤组织或芽的诱导增殖情况。将从生芽分株转入生根培养基中，培养环境同诱导愈伤组织条件相同，观察生根情况。生根后移栽在泥炭：珍珠岩二3：2的混合基质中。2培养基的配制2.1启动培养基%1MS+6-BA0.lmg/L+NAAO.lmg/L（单位下同）。%1MS+6-BA0.5mg

3、/L+NAA0.lmg/Lo%1MS+6-BAI.Omg/L+NAAO.lmg/L02.2增殖培养基©MS+6-BA1.5+NAAO.lmg/Lo%1MS+6-BA1.5+NAAO.05mg/Lo%1MS+6-BAI.O+NAAO.lmg/L©MS+6-BA1.O+NAAO.05mg/Lo2.3生根培养基%11/2MS+IBA0.3mg/Lo%11/2MS+IBA0.6mg/Lo%11/2MS+IBA0.9mg/Lo%11/2MS+IBA1.2mg/Lo3结果与分析2.1光照温度控制经试验橡皮树组织培养对温度、光照条件的要求不太严，一般在自然散射光照射下，

4、幼苗在玻璃瓶内生长很好，最适宜的温度范围在18~28°Co3.2芽的启动及增殖培养将橡皮树的外植体接种于启动培养基中，20天后观察芽丛分化情况。试验结果表明，激素浓度的不同，对橡皮树启动培养基有明显的影响。在NAA浓度为一定值的情况下,6-BA设置0.lmg/L>0.5mg/L>1.0mg/L各3种浓度，处理③的诱导率最高，为95%；处理①的诱导率最低，为80.33%O通过对平均芽数的统计分析可知，处理③与①间有显著差异，激索浓度的增高有利于芽的生长速度和健壮程度。宙此可见，诱导橡皮树不定芽的启动培养皋③MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.lmg/L是

5、最佳培养基组合，培养效果见表1。25天后，切去长约0.5cm.饱满、带有腋芽的茎段，接种到4种培养基上，18d液芽开始萌动，同时在茎段的基部四周出现黄白色较致密的愈伤组织，茎段上端切口处（没与培养基接触）也岀现少量黄白色愈伤组织。接种38d观察，茎段基部及上端切口处愈伤组织增多，液芽变长变绿。接种48d观察，液芽处有一对新叶出现，同时在基部增大的较致密的愈伤组织上可看到绿色芽点。这时将外植体取出，将液芽及时转到增殖培养基。接种后第28天观察芽丛分化情况。试验结果表明：6-BA浓度在1.0-1.5mg/L和NNA浓度在0.05〜0.1mg/L范围内,不定芽都

6、能增殖,而在MS+6-BA1.Omg/L+NAAO.lmg/L的培养基上效果最好，增殖系数可达4.9,增殖培养结果见表2。3.3不同浓度激素对橡皮树组培苗牛根的影响从橡皮树组培苗上截取长约2cm、粗壮而又生长良好的茎段，接种到4种培养基上，10〜15d,接种茎段的基部、节间上开始出现不定根。随着时间的推移，根不断加粗增多，长成完整的再生植株，18d后观察生根情况。生根结果见表3。试验结果表明：在4种生根培养基中均能长出根，即对培养基的要求不严格。但在1/2MS+TBA0.5nig/L中，组培苗的长势、生长量、生根的质量为最佳，可长出2.5〜4.0cm长的粗

7、壮根，生根率也达到最高。3.4橡皮树组培苗的生根将继代培养基上的无根幼苗，在无菌条件下，转移到生根培养基上培养，约7〜10天即成幼植株。一般在根长0.l~0.5cm时，将幼苗移到瓶外，把沾带的培养液冲洗干净，然后移栽到经高温消毒的河沙与珍珠岩混合的基质上培养。3.5生根组培苗的移栽组培苗生根后先打开瓶口晾2~3天，洗净琼脂，防止滋生微生物。然后将生根组培苗移栽到含有基质、配比为泥炭土：珍珠岩二3：2的苗床中。组培苗出瓶2个星期后，叶子明显变绿，新根产生，成活率在97.7%（见表4）4移栽4・1移栽技术移植盆外是组织培养的最后一道工序，由瓶内移出瓶外，幼苗所

8、处的环境有很大的变化：由异常到自养；由弱光到光到强光；由无菌到有菌