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1、·846·中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第34卷第9期2003年9月·药材·四倍体菘蓝转抗虫基因研究Ⅱ.转半夏凝集素基因菘蓝的分子生物学检测11122111⒇许铁峰,张磊,刘成洪,谭秋敏,唐克轩,郭美丽,乔传卓,张汉明(1.第二军医大学药学院生药教研室,上海200433;2.复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室,上海200433)摘要:目的获得转基因菘蓝的分子生物学证据。方法对经卡那霉素筛选的抗性再生菘蓝苗进行聚合酶链式反应(PCR),Southern杂交和RT-PCR检测。结果PCR和South
2、ern杂交检测结果表明,外源半夏凝集素基因已经整合到转基因菘蓝的基因组中,RT-PCR结果表明其DNA可以正常转录成mRNA。结论可以利用农杆菌介导的基因转化技术培育抗虫的菘蓝新品系。关键词:菘蓝;半夏凝集素基因;聚合酶链反应;SouthernBlot;RT-PCR中图分类号:R282.1文献标识码:A文章编号:02532670(2003)09084604AgrobacteriumtumefaciensmediatedtransgenictetraploidIsatisindigoticacarryinganti-insectgenefrom
3、Pinelliaternataagglutinin(Ⅱ)11122XUTie-feng,ZHANGLei,LIUCheng-hong,TANQiu-min,TANGKe-xuan,111GUOMei-li,QIAOChuan-zhuo,ZHANGHan-ming(1.SchoolofPharmacy,SecondMilitaryMedicalUniversity,Shanghai200433,China;2.StateKeyLaboratoryofGeneticEnginerring,SchoolofLifeSciences,FudanUni
4、versity,Shanghai200433,China)Abstract:ObjectTogetmolecularproofoftransgenicIsatisindigoticaFort.MethodsTheregen-eratedI.indigoticaplantletsonkanamycin-containingmediawereanalysedwithpolymerasechainreaction(PCR),SouthernBlotandRT-PCRmethods.ResultsPCRandSouthernBlotanalysiss
5、howedthattheforeignPTAgenewereinsertedintothegenomeofthetransformedI.indigoticaplants.FurtherRT-PCRshowedthattheforeignPTAgenecouldbetranscriptedintomRNAnormally.ConclusionPestresistantI.indigoticacanbeobtainedthroughAgrobacterium-mediatedtransformation.Keywords:Isatisindig
6、oticaFort.;Pinelliaternataagglutinin;polymerasechainreaction(PCR);SouthernBlot;RT-PCR植物凝集素是指含有至少一个非催化结构域并殖,从而达到杀虫目的。能够可逆性结合到特异单糖或寡糖上的所有植物蛋天南星科属三叶半夏Pinelliaternata白质。自然界中广泛分布,多存在于植株最易受攻击(Thunb.)Breit.为我国特有的一种多年生草本药的部位,对病原真菌、细菌、昆虫都有一定的抑制作用植物,其块茎为多用途中草药。凝胶过滤法测定半[1]4用。目前发现有些外源凝
7、集素对同翅目、鞘翅目和夏凝集素(PTA)相对分子质量为4.4×10,由4个4双翅目的昆虫有毒性。植物凝集素确切的作用机制约1.2×10的相同亚基组成,结合甘露糖,与雪花现今并未研究清楚,一般认为植物凝集素的抗虫毒莲凝集素(GNA)相似。PTA具有凝集细胞和促使性基于它们一旦被害虫摄食,外源凝集素就会在昆细胞分裂的作用。PTA基因是一种有重要价值的抗虫的消化道中被释放出来,特异结合到昆虫肠的糖虫基因。PTA粗提液对刺吸式同翅目害虫(如棉蚜[2]缀合物上,这些结合影响了营养物质正常吸收,同时等)有显著致死作用。通过对根癌农杆菌介导获得还可能在消化
8、道内诱发病灶,促进消化道内细菌繁的转半夏凝集素基因四倍体菘蓝进行了分子生物学殖,对害虫本身造成危害,抑制害虫生长、发育和繁检测,分析了外源基因的表达特征。⒇收稿日期
