nyt 573-2002 弓形虫病诊断技术.pdf

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1、ICS11.220s41中华人民共和国农业行业标准NY/T573一2002弓形虫病诊断技术Diagnostictechniquesfortoxoplasmosis2002一08一27发布加02门2一01实施中华人民共和国农业部发布NY/'r573-2002前A弓形虫病是由刚第弓形虫(roxoplasmagondii)引起的一种人畜共患寄生虫病该病呈世界性分布，各种家畜，包括猪、牛1羊、犬、猫和实验动物，包括小白鼠、天竺鼠、家兔等，以及人类，都能感染弓形虫弓形虫病可使孕畜流产死胎，急性弓形虫病可造成家畜的死亡。

2、弓形虫感染孕妇后可引起流产，胎儿畸形或产出弱智儿。弓形虫感染成人后，可侵害神经系统、呼吸系统、心脏、淋巴内皮系统等多种器官或系统，并造成损伤，严重时会造成死亡。因此。弓形虫病具有重要的公共卫生意义本标准由农业部畜牧兽医局提出。本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归门。本标准起草单位:中国农业大学、中国农业科学院兰州兽医研究所本标准主要起草人:汪明、杜重波、潘保良、刘群NY/'r573--2002弓形虫病诊断技术范围本标准规定f弓形虫病的诊断技术要求。本标准所规定弓形虫的分离鉴定适用于本病的确诊;间接血凝试验适

3、用于大批量样品的普查。弓形虫的分离鉴定2门材料准备2门门器材:玻璃组织研钵，无菌砂子，5ml注射器及f头2.1.20.8/生理盐水:加人青霉素和链霉素，使其终浓度分别为100It'!m工和10pg/ml.o2门3蛋自酶2.1.4健康实验小白鼠27只。2.2待检样品的采集及处理无菌采取病畜的脑组织、心、肝、肺、’肾、骨骼肌各2g，以及3ml腹腔液，所取组织或器官材料分别放人玻璃组织研钵中。加人无菌砂子和。.8%的无菌盐水进行研磨，研磨成组织糜。研磨好的组织(器官)，用0.8%的盐水配制成10%20%的组织悬浮液

4、。肺组织和肌肉组织悬浮液加人蛋白酶消化。消化后的组织悬浮液用于接种，腹腔液不用处理可直接接种。2.3操作方法接种:选取27只健康试验用小白鼠，分为9组，每组3只。作如下处理:空白对照组(1组):不作任何处理;生理盐水接种组(1组):每只小鼠腹腔接种生理盐水1m工;病料接种组(共7组):每只小鼠分别腹腔接种2.2所制备的待检样品Iml。2.4检查与判定小鼠接种待检样品后，如在2d-14d内发生死亡，则应抽取腹腔渗出液涂片镜检。同时另采集脑、肝、肺、脾涂片，涂片进行姬姆萨染色后用显微镜镜检。若小鼠未发生死亡则应在

5、接种后的6-8周对小鼠进行捕杀，并按卜述方法取样镜检。若在小鼠腹腔液中查出速殖子”或所取的组织样品中查出包囊“，或缓殖子弓’，则可将待检样品判为阳性。没有查出则判为阴性"S空自对照组和生理盐水接种组没有查出弓形虫时，可进行结果判定.否则应重检当所检样品中，有一个为阳性，即说明被检动物已被弓形虫感染，将其判为阳性;当所检样品全部为阴性时，将被检动物判为阴性])速殖r呈月芽形，长为1,,.,--8pn，宽为21。~tVm包囊呈球形·囊壁薄.汽径为2s1-100u,n2)包囊内什衬充满圆形或月芽状的缓殖子.缓殖子长

6、为3t,n.宽为2脚11一‘幻川3)缓fitf对姬姆萨染液高度敏感，呈嗜碱性NY/'r57320023间接血凝试验OHA试验)11材料准备3.1.196(12x8)孔II00V形有机玻璃反应板，100pL微量加样器，振荡器K用离心机，移液管等。31.2弓形虫诊断制剂(III八抗原)，稀释液，阳性、阴性血清3.2操作方法3.2-1弓形虫诊断制h9按瓶上标示毫升数加人灭菌蒸馏水稀释摇匀，}500r:'min^-2000r/min离心5min一10min，弃上清液、加等量稀释液摇匀，置4C卜静置24h后使川.12.

7、2采被检疫动物或人的血液2ml,-2.5nil，分离血清(应无血球)。3.2.3川微W:加样器往96孔有机玻璃反应板梅孔加75IA.稀释液每个样品加4孔。每块板设阳性、阴性III[94对照〔对照均加8孔3.2.411齐组第!孔加25rd的被检血清，或阳性血清，或阴性血清12.5用加样器对每组进行1:4系列稀释，被检血清组稀释至第3孔。阳、阴性对照组稀释至第7孔。被检血清组第4孔。阳、阴性对照组第8孔为稀释液(见表1)表1各组各孔的稀释度3.2.6将准备好的诊断液摇匀。用移液管加25uI诊断液于每孔中加完后将反

8、应板置微型振荡器上振荡Imin-2min，直至诊断液中的血球分布均匀，从振荡器上取下反应板，用干净的玻璃板或纸板盖住反应板，以防灰尘落人，置22C-37C静置2h-3h后观察结果3.3判定在阳性对照血清滴度不低于1:1024(第5孔);阴性对照血清除第1孔允许存在前滞现象(+)外，其余各孔均为(一);稀释液对照为(一)的前提下，对被检血清进行判定，否则应重做。间接血凝试验的判定标准如下:+十一4-"