免疫学检测技术.pptx

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1、第七章免疫学检测技术免疫学检测技术原理免疫荧光技术在食品检测中的应用酶免疫技术在食品检测中的应用放射免疫技术在食品检测中的应用单克隆抗体技术在食品检测中的应用第一节免疫学检测技术原理1.1抗原或抗体检测原理免疫学检测技术中的荧光免疫技术、酶免疫技术、放射免疫技术在食品检测中得到了广泛的应用。利用免疫学检测技术可检测细菌、病毒、真菌、各种毒素、寄生虫等，还可用于蛋白质、激素、其他生理活性物质、药物残留、抗生素等的检测。抗原：能刺激机体产生抗体和致敏淋巴细胞，并能与之结合引起特异性免疫反应的物质。抗体：在抗原刺激下产生的，并能与之特异性结合的免疫球蛋白。第一节免疫学检

2、测技术原理1.2抗原或抗体检测原理抗原或抗体检测原理：借助抗原和抗体在体外特异性结合后出现的各种现象，可对标本中抗原或抗体进行定性或定量检测。定性检验：观察现象的有无。定量检验：反应产生的免疫复合物的多少与待检样品中含有相应抗原（或抗体）量成正比第一节免疫学检测技术原理1.3抗原或抗体检测原理用荧光素、同位素或酶标记抗体或抗原，用于抗原或抗体检测是目前广泛应用的敏感、可靠的方法。荧光免疫技术：用化学方法使抗体（或抗原）标记上荧光素，形成荧光标记的抗体（或抗原），再与组织或细胞中的相应抗原（或抗体）结合，进行定性定位检查抗原或抗体。酶联免疫分析法：将抗原抗体反应的特

3、异性与酶对底物的高效催化作用结合起来，根据酶作用底物后显色，以颜色变化判断实验结果，可经酶标测定仪做定量分析。放射免疫分析法：应用竞争性结合的原理，使放射性同位素标记抗原（或抗体）与相应抗体（或抗原）结合，通过测定抗原抗体结合物的放射活性判断结果。第二节免疫荧光技术在食品检测中的应用2.1免疫荧光技术的基本原理原理：抗体与荧光素结合后，并不影响其和相应抗原发生特异性结合反应，事先将待测抗原固定于载玻片上，滴加荧光标记抗体，若荧光标记抗体与相应抗原发生特异性结合反应，不能被缓冲液冲洗掉，在荧光显微镜下可以观察到荧光，否则荧光抗体被缓冲液冲掉，在荧光显微镜下什么都观察

4、不到。荧光色素：一种能吸收及发光的光能产生荧光，并能作为染料使用的有机化合物。第二节免疫荧光技术在食品检测中的应用2.2免疫荧光技术的检测方法直接法：滴加荧光抗体于待检标本片上，经反应和洗涤后在荧光显微镜下观察，标本中如果有相应抗原村在，即与荧光抗体特异结合，在荧光显微镜下可见有荧光的抗原抗体复合物。间接法：将待测抗体（第一抗体）加在含有已知抗原的标本片上作用一定时间，洗去为结合的抗体；再滴加标记抗体（第二抗体），形成抗原抗原-抗体-标记抗体复合物，并显示荧光。第二节免疫荧光技术在食品检测中的应用2.3在食品检测中的应用沙门氏菌3.1基本原理免疫酶技术：酶与抗原或

5、抗体结合，制成酶标抗原或抗体，既保持抗原或抗体特异性，又不影响酶本身活性，进行抗原抗体特异反应后，再加入酶的底物，使其发生酶解作用，产生显色反应，从而定性、定量测定样品中的抗原或抗体。酶联免疫吸附法（ELISA）：先将可溶性抗原或抗体吸附于聚苯乙烯等固相载体表面，再加入被HRP标记的抗原或抗体，加入HRP的底物，进行免疫酶法应，产生明显黄色产物，以酶标仪测定OD值。第三节酶免疫技术在食品检测中的应用3.1基本原理第三节酶免疫技术在食品检测中的应用3.1基本原理第三节酶免疫技术在食品检测中的应用3.2测定方法ELISA法必须严格按照规定的方法制备试剂和实施测定。第三

6、节酶免疫技术在食品检测中的应用加样保温洗涤比色结果3.3基本应用在免疫学方面用于检测多种病原菌抗原或抗体，血液及其他体液中微量蛋白成分、细胞因子等；在食品加工领域用于测定蛋白质、激素、其他生理活性物质、药物残留、抗生素等；在食品安全方面用于检测果蔬农药残留、动物食品抗生素残留、食源性病原菌及其毒素，真菌及毒素、病毒、寄生虫的检测，例如沙门氏菌及其毒素等。第三节酶免疫技术在食品检测中的应用4.1基本原理放射免疫分析，特别适用于微量蛋白质、激素和多肽的精确定量测定，是定量分析方面的一次重大突破。将标记抗原、非标记抗原和特异性抗体三者置于一个系统内的反应。再将抗原-抗体

7、复合物(B)与游离标记抗原(F)分开，测量放射性强度，得到比值(B/F)。由于标记抗原与特异性抗体的量是固定的，因此比值(B/F)随非标记抗原的量而改变。改变非标记抗原的量，就可以绘制出一条剂量-反应曲线。受检标本在同样条件下进行测试，计算比值(B/F)，在曲线上查出标本中抗原的含量。第四节放射免疫技术在食品检测中的应用4.1基本原理第四节放射免疫技术在食品检测中的应用4.2放射免疫在食品检测中的应用放射免疫分析敏感度高、特异性强、精密度高，不仅可以检测经食品传播的细菌及毒素、真菌及毒素、病毒和寄生虫，还可测定小分子质量和大分子质量物质，在食品检验中应用极广。第四

8、节放射免疫