DB52T 953-2014 贵州辣椒品种SSR 标记鉴定技术规程.pdf

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1、ICS65.020.01B21DB52贵州省地方标准DB52/T953—2014贵州辣椒品种SSR标记鉴定技术规程2014-10-30发布2014-11-30实施贵州省质量技术监督局发布发布贵州省农业委员会发布DB52/T953—2014目次前言................................................................................II1范围.............................................................

2、.................12规范性引用文件....................................................................13术语和定义........................................................................14试剂..............................................................................15辣椒品种鉴定的SSR标记

3、（见附录A）.................................................26分析步骤..........................................................................27结果判定..........................................................................3附录A（资料性附录）辣椒品种鉴定SSR标记的PCR引物..........................

4、........5I学兔兔www.bzfxw.comDB52/T953—2014前言本标准按照GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。请注意：本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由贵州省农业委员会提出并归口。本标准起草单位：贵州省辣椒研究所、贵州省标准化院、贵州省旱粮研究所。本标准主要起草人：何建文、付文婷、朱云乐、杨文鹏。本标准由贵州省辣椒研究所负责解释。IIDB52/T953—2014贵州辣椒品种SSR标记鉴定技术规程1范围本规程规定了辣椒品种

5、SSR标记鉴定方法。本标准适用于贵州辣椒品种及种质资源鉴定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1简单重复序列(SimpleSequenceRepeat，SSR)微卫星DNA，其串联重复的核心序列为1bp-6bp，其中最常见是双核苷酸重复，即(CA)n和(TG)n每个微卫星DNA的核心序列结构相同，重复单位数目

6、10-60个，其高度多态性主要来源于串联数目的不同。4试剂以下所用试剂，除特别注明外，均为分析纯试剂，水符合国家GB/T6682中规定的一级水标准。4.11M三羟甲基氨基甲烷-盐酸Tris-HCl称量121.1gTris置于1L烧杯中，加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解，用浓盐酸调pH值至8.0，加ddH2O定容至1L。4.20.5M乙二胺四乙酸二钠EDTA称取186.1gEDTA置于1L烧杯中，加入约800mL的去离子水，充分搅拌。用NaOH调节pH值至8.0，加ddH2O定容至1L。4.35×TBE缓冲液称取54gTris

7、-base、27.5g硼酸（H3BO3）、3.72gEDTA(乙二胺四乙酸二钠)加ddH2O定容至1L。4.4CTAB提取液1DB52/T953—2014分别量取10ml1mol/LTris-HCL、30ml0.5mol/LEDTA、42ml5mol/LNaCl、PVP2g、CTAB2g，加水溶解后定容至100ml，使用前加入1ml巯基乙醇。4.56%变性测序胶称取460g尿素，57g丙烯酰胺，3g甲叉双丙烯酰胺，200ml5×TBE溶液，再加少量ddH2O，短暂加热（≯37℃），搅溶溶解，滤纸过滤，加水定容至1000ml。4.6固

8、定液量取无水乙醇75ml，冰醋酸3.5ml，加ddH2O定容至1L。4.7染色液称量2g硝酸银溶于1LddH2O。4.8显影液称量15gNaOH，4ml甲醛混合均匀，加ddH2O至1L。4.9终止液称量7.5gNa2CO3溶于1Ldd