DB13T 1384.4-2011 饲料中新霉素的测定.pdf

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1、ICS65.120B46DB13河北省地方标准DB13/T1384.4—2011饲料中新霉素的测定Determinationofneomycininfeed2011-05-10发布2011-05-20实施河北省质量技术监督局发布DB13/T1384.4—2011前言本标准按照GB/T1.1－2009给出的规则起草。本标准由河北省质量技术监督局提出。本标准起草单位：河北省食品质量监督检验研究院、石家庄市疾病预防控制中心、北京出入境检验检疫技术中心、河北医科大学、河北省饲料产品质量监督检验站。本标准主要起草人：张岩、张宏、李挥、杨立学、丛斌、卢晓宇、吕品、李志平、

2、沈磊、贾茜、马春玲、米振杰、李强、高振同、武英利。IDB13/T1384.4—2011饲料中新霉素的测定1范围本标准规定了饲料中新霉素的液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于饲料中新霉素的测定。本标准的方法检出限为40μg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682－1992，neqISO3696:1987)3原理试样经提取，高速离心后再用CBX固相萃取小柱净化

3、，液相色谱串联质谱测定，子离子丰度比定性，外标法定量。4试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1甲醇：色谱纯。4.2七氟丁酸酐（HFBA）：优级纯。4.3三氯乙酸。4.4磷酸二氢钾（KH2PO4）。4.5盐酸。4.6二水合乙二胺四乙酸二钠（Na2EDTA·2H2O）。4.7样品提取液（10mmol/LKH2PO4溶液，含0.4mmol/LEDTA和2％三氯乙酸）：准确称量1.36gKH2PO4于1000mL容量瓶中，加入少量水，用盐酸调pH至4.0，再加入1.5gNa2EDTA·2H2O和20g三氯乙酸，用水定容至刻

4、度，混匀即得。4.8氢氧化钠4.9新霉素标准品：纯度≥99％。。4.10新霉素标准储备溶液：分别称取经折算相当于0.0100g新霉素的标准品，用水溶解定容至100mL，溶液浓度为100g/mL。1℃～4℃冷藏保存，保存期1个月。4.11空白样品提取液：用不含链霉素的样品，按照6.1和6.2制备空白样品溶液。4.12新霉素标准工作溶液：根据需要用空白样品溶液将标准储备液稀释成15ng/mL、25ng/mL、50ng/mL、250ng/mL、300ng/mL的混合标准工作溶液，相当于样品中含有6g/kg、10g/kg、20g/kg、100g/kg、120g/kg新

5、霉素，现配。1DB13/T1384.4—20114.13CBX阳离子交换柱，或相当者：500mg，6mL。4.14乙酸。4.1510％乙酸甲醇溶液：准确量取10mL乙酸于100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混匀即可。4.16100mmol/LHFBA水溶液：准确量取6.5mL七氟丁酸酐，用水稀释至500mL（4℃避光保存6个月）。4.1720mmol/LHFBA水溶液：准确量取100mmol/LHFBA溶液50mL，用水稀释至250mL（4℃避光保存6个月）。4.185mmol/LHFBA水溶液：准确量取20mmol/LHFBA溶液25mL，用水稀释至100

6、mL（4℃避光保存6个月）。4.1920mmol/LHFBA乙腈溶液：准确量取1.3mL七氟丁酸酐，用乙腈稀释至500mL（4℃避光保存6个月）。5仪器和设备5.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。5.2微孔滤膜。5.3pH计。5.4高速离心机。5.5旋涡混匀器。5.6固相萃取装置。6测定步骤6.1提取准确称取样品1g（精确到0.01g）至10mL离心管中，加样品提取液10mL，旋涡混匀10min，12000r/min离心10min，移出上清液。重复提取一次，合并上清液，调pH至8.0，12000r/min离心10min，取上清液备用。6.2净化将上清液

7、移入CBX柱（使用前分别用5mL甲醇、5mL水预处理，保持柱体湿润）。溶液以2.0mL/min的流速过柱，然后依次用水淋洗，减压抽干20min。用10％乙酸甲醇溶液5mL洗脱，收集洗脱液于40℃下氮气吹干。用5mmol/LHFBA水溶液0.5mL溶解残渣，15000r/min离心10min，经0.22μm滤膜过滤后，待测。6.3测定6.3.1液相色谱-串联质谱条件色谱柱：C18，5μm，50mm×2.lmm（内径）或相当者。流动相：20mmol/LHFBA水溶液（A）＋20mmol/LHFBA乙腈溶液（B）。流速：0.25mL/min。梯度：0min～10.0

8、min5％～60％B，10.0min～